论文摘要
目的:建立适用于临床治疗的规范的树突状细胞（dendritic cell,DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer,CIK）免疫治疗体系,为形成新的非小细胞肺癌（NSCLC）个体化综合治疗模式奠定基础;比较DC联合CIK结合化疗组与常规化疗对照组的治疗效果,从而客观全面地评价DC联合CIK治疗肺癌的临床有效率,为DC联合CIK的推广应用和科学评价提供有价值的资料。方法:1.采集了20例NSCLC患者外周血单个核细胞加入各种细胞因子体外培养DC及CIK,DC培养至第7天时加入培养的CIK,LDH方法检测CIK细胞的杀伤活性,ELISA及ELISPOT方法检测CIK分泌细胞因子水平,流式细胞术检测DC与CIK共同培养后CIK的表型。2.临床研究采用DC联合CIK与常规化疗间隔进行的方案,选择了120例NSCLC患者进行研究,包括50例术后患者和70例晚期患者。分别对术后生物治疗组和晚期生物治疗组患者进行生存分析,通过影像学检查、生化检查,观察生物治疗患者临床疗效变化,依据卡氏评分标准评价患者生活质量改善状况。3.设立常规化疗对照组,选择术后生物治疗+化疗组、常规化疗组同期配对患者各42例,晚期生物治疗+化疗组、常规化疗组同期配对患者各61例,比较生物治疗+化疗组与常规化疗对照组的无病生存率及总生存率。4.应用细胞因子抗体芯片技术检测10例NSCLC患者生物治疗前后外周血细胞因子,比较生物治疗前后细胞因子的表达水平,同时,观察临床疗效与细胞因子变化的关系;流式细胞术检测肺癌患者生物治疗前后外周血T细胞亚群及NK细胞。结果:1.DC+CIK对肺癌细胞系A549、乳腺癌细胞系MCF-7、结肠癌细胞系HCT-8和淋巴瘤细胞系Raji的杀伤活性均高于单纯CIK组（P＜0.05）;经DC诱导后CIK细胞TGF-β和IL-10分泌水平均低于单纯CIK组（P＜0.05）,同时,DC+CIK组IFN-γ分泌水平高于单纯CIK组（P＜0.05）;DC+CIK中CD4+CD25+Tregs的数量较单纯CIK组明显降低（P＜0.05）,而CD3+CD56+CIK数量增加（P＜0.05）。2.生物治疗回输后除个别患者出现低热外,未观察到患者出现严重不良反应。术后生物治疗组患者2年无病生存率为77.8±6.3%,总生存率为93.2±3.9%,生物治疗＞4次较≤4次患者的2年无病生存及总生存率显著提高（P＜0.05）,分别为82.94±7.9%vs 56.04±12.1%,100%vs 83.54±8.9%;3.晚期生物治疗组患者预期1,2,3年生存率分别为59.6±5.9%,29.6±6.1%,21.8±6.0%,生物治疗≥3次较＜3次患者的2年生存率显著提高47.1±9.8%vs 15.4±6.5%（P＜0.05）。4.术后生物治疗组较晚期生物治疗组患者生活质量有所提高77.8%vs 68%。5.术后患者生物治疗组较常规化疗对照组2年总生存率显著提高94.7±3.6%vs 78.8±7.0%（P＜0.05）,无病生存率无统计学差异:晚期患者生物治疗组较常规化疗对照组2年生存率显著提高27.0±6.3%vs 10.1±4.6%（P＜0.05）。6.生物治疗后10例NSCLC患者血清中IL-2,IL-5,IL-6,MCP-2,MCP-3水平升高,而TGF-β,IL-1α,IL-8和MCP-1等细胞因子降低或无变化,生物治疗后未见复发/转移的患者治疗后血清中IFN-γ,G-CSF,GRO,GRO-a,IL-10,IL-13,MIG,TNF-a,TNF-β较治疗前升高,而复发/转移组患者治疗后上述细胞因子降低或无变化。结论:通过基础研究证实了DC与CIK共培养后,CIK增殖能力和杀伤肿瘤活性提高;临床研究证实了DC联合CIK治疗能够延长患者的生存期,提高患者的生存率和生活质量以及改善患者机体的免疫状况。