2,2,6,6-四甲基-3-烯哌啶氮氧鱼藤酮肟酯体外抗肿瘤作用研究

论文摘要

目的：肿瘤细胞不受正常生长调控系统的控制,具有持续分裂和增殖,细胞周期失控,高迁移性和不死性等生理特征。因此,许多抗癌的研究涉及抑制细胞增殖,调控细胞周期,抑制细胞迁移以及诱导细胞凋亡。2,2,6,6-四甲基-3-烯哌啶氮氧鱼滕酮肟酯（2,2,6,6-tetramethyl-3-ene-piperidine nitroxide rotenone proxetil, PNR）是一种以具有抗肿瘤活性的植物提取物鱼滕酮为原料半合成的化合物。本实验针对PNR对肿瘤细胞的生长抑制活性,迁移抑制活性,周期阻滞活性和凋亡诱导活性做了初步的研究。方法：用磺酰罗丹明B（Sulforhodamine B,SRB）法检测PNR对人舌癌细胞Tca8113、人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞BCG823和人膀胱癌细胞EJ增殖能力的影响；用Transwell迁移法考察PNR对Tca8113细胞迁移能力的影响；用流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）检测PNR对Tca8113细胞周期的影响；用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（4’,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI）荧光染料从细胞形态学检测PNR对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：PNR对舌癌Tca8113细胞、肺癌A549细胞、肝癌HepG2细胞、胃癌BCG823细胞和膀胱癌EJ细胞均有增殖抑制活性。PNR在2～7μg/mL剂量范围内,对舌癌Tca8113细胞和膀胱癌EJ细胞增殖抑制活性呈现明显的量效依赖关系,时效关系不明显；PNR在0.8～12μg/mL剂量范围内,对肺癌A549细胞、肝癌HepG2细胞和胃癌BCG823细胞的增殖抑制活性均呈现明显的时效和量效依赖关系；不同肿瘤细胞对PNR的敏感性不同,PNR对Tca8113细胞的增殖抑制效果最好,当PNR剂量为7μg·mL-1,与Tca8113细胞作用大于（等于）48h时,增殖抑制率高达90%；PNR能明显抑制Tca8113细胞的迁移活性,当PNR剂量为6μg·mL-1时,迁移抑制率可达72%；PNR对Tca8113细胞有S期阻滞作用；PNR对Tca8113细胞具有显著的凋亡诱导活性,当PNR剂量为6μg·mL-1与Tca8113细胞作用大于（等于）24h时,凋亡诱导率达到65.7%。结论：PNR具有一定的抗肿瘤活性,能抑制多种肿瘤细胞的增殖,对Tca8113细胞的增殖抑制效果最好,其机制可能与PNR对细胞具有S期阻滞活性和凋亡诱导活性有关。另外,PNR能较好的抑制Tca8113细胞的迁移活性。

论文目录

• 中英文术语缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试剂与仪器
• 2.2 溶液配制
• 2.2.1 药物及培养基的配制
• 2.2.2 主要溶液的配制
• 2.3 细胞培养
• 2.4 细胞的冻存及复苏
• 2.5 细胞计数
• 2.6 SRB法检测PNR对肿瘤细胞增殖的影响
• 2.7 Transwell迁移法检测PNR对肿瘤细胞迁移的影响
• 2.8 FCM测定PNR对肿瘤细胞周期的影响
• 2.9 DAPI染色法观察PNR对肿瘤细脆形态变化的影响
• 2.10 统计方法
• 第三章 结果
• 3.1 PNR对不同肿瘤细胞增殖活性的影响
• 3.1.1 PNR对Tea8113细胞增殖的抑制作用
• 3.1.2 PNR对A549细胞增殖的抑制作用
• 3.1.3 PNR对HepG2细胞增殖的抑制作用
• 3.1.4 PNR对BCG823细胞增殖的抑制作用
• 3.1.5 PNR对EJ细胞增殖的抑制作用
• 3.2 PNR对TCA8113舌癌细胞迁移的影响
• 3.3 PNR对TCA8113舌癌细胞周期的影响
• 3.4 PNR对TCA8113舌癌细胞形态的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 第六章 论肿瘤细胞的周期、凋亡及迁移
• 6.1 肿瘤细胞之细胞迁移
• 6.2 肿瘤细胞之细胞周期
• 6.3 肿瘤细胞之细胞凋亡
• 参考文献
• 附录
• 在学期间研究成果
• 致谢