ω-3多不饱和脂肪酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及其分子机制的研究

论文摘要

目的:本研究拟行体外实验观察ω-3多不饱和脂肪酸的主要成分二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid, EPA）、二十二碳六烯酸（ducosahexenoic acid, DHA）对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡和SOD、MDA的影响,并初步探讨其分子作用机制。以期为肝癌治疗探索新的途径。方法:以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,进行体外水平的研究。1.采用MTT法测定（1）不同浓度DHA、EPA对人肝癌细胞HepG2细胞存活率的影响。（2）5-FU单用及与不同浓度DHA、EPA合用对人肝癌细胞HepG2的细胞毒性作用。2.免疫荧光染色检测凋亡形态（Hoechst33258染色）。3.流式细胞仪检测细胞凋亡率。4.黄嘌呤氧化酶法测定总SOD活力,TBA法测定MDA含量。结果:1. DHA、EPA对人肝癌细胞HepG2的细胞毒作用。在一定浓度DHA对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用（P <0.05）,而且随着作用时间延长抑制率增加。24、48、和72h IC5值分别是（160.87±2.13）μg/ml、（82.39±1.76）μg/ml、（70.71±1.52）μg/ml。同样,在一定浓度EPA对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用（P <0.01）,而且随着作用时间延长抑制率增加。24、48、和72h IC50值分别是（89.09±1.56）μg/ml、（72.68±2.05）μg/ml、（56.4±1.38）μg/ml。2. 5-氟尿嘧啶联用不同浓度DHA、EPA对人肝癌细胞HepG2的细胞毒性作用。本实验采用5-FU（5μg/ml）单用,及其分别和DHA（20、40、60μg/ml）、EPA（20、40、60μg/ml）联用,与5-FU单用组比较,DHA、EPA联用与5-FU单用相比可以明显增加对肝癌细胞HepG2毒性。因此,DHA和EPA有望成为化疗辅助药物。3. EPA和DHA对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响。Hochest33258染色显示对照组细胞核较大,表面光滑,较圆,细胞核发蓝色荧光。在EPA和DHA（80μg/ml）分别预处理48h后,细胞核染色密度增高呈半月形,并凝聚在核膜周边,核仁裂解。4.流式细胞仪检测细胞凋亡率。60、80μg/ml DHA作用48h后,HepG2细胞凋亡率分别为6.52%、14.67%。60、80μg/ml EPA作用48h后,HepG2细胞凋亡率分别为12.31%、32.12%,并且随着药物浓度增加凋亡率升高。各浓度差别有统计学意义（P <0.05）。5. EPA和DHA对人肝癌细胞HepG2总SOD活力和MDA含量的影响。各用药组人肝癌细胞HepG2总SOD活力均有明显降低（P <0.05）,且80、100μg/ml l浓度组比60μg/ml浓度组EPA或DHA对细胞总SOD活力具有更加明显的降低作用（P <0.05）。用80、100μg/ml l浓度EPA或DHA处理肝癌细胞后,肝癌细胞MDA含量均有明显升高（P <0.05）。结论:1. DHA、EPA在体外能显著抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖。2. DHA、EPA和5-FU联用组与5-FU单用组相比有增效作用。3. DHA、EPA可以诱导人肝癌细胞HepG2凋亡。4. DHA、EPA可能通过影响细胞脂质过氧化来抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并诱导凋亡。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 综述ω-3 多不饱和脂肪酸与恶性肿瘤
• 1.1 ω-3 多不饱和脂肪酸概述
• 1.2 ω-3 多不饱和脂肪酸可以提高对化疗的反应
• 1.3 ω-3 多不饱和脂肪酸修饰细胞功能
• 1.4 对膜相关信号传导的影响
• 1.4.1 Ras 信号
• 1.4.2 P13K/Akt 信号
• 1.4.3 Her-2/neu 信号
• 1.4.4 脂质筏相关信号
• 1.5 脂质过氧化反应
• 1.6 对NF-κB 信号的影响
• 1.7 对药物吸收的作用
• 1.8 对凋亡的调节作用
• 1.9 对核甘类似物代谢的影响
• 1.10 对COXII 的影响
• 1.11 对NO 合酶影响
• 1.12 对有丝分裂的影响
• 1.13 对恶病质的影响
• 1.14 小结
• 第2章 前言
• 第3章 材料与方法
• 3.1 实验材料
• 3.2 主要实验试剂配制
• 3.2.1 RPMI-1640 培养基的配制
• 3.2.2 0.25%胰酶的配制
• 3.2.3 PBS 液配制
• 3.3 主要器材及仪器
• 3.4 实验方法
• 3.4.1 MTT 比色法实验原理
• 3.4.2 细胞生长曲线
• 3.4.3 实验分组
• 3.4.4 设定药物浓度
• 3.4.5 实验步骤
• 3.5 免疫荧光染色（Hochest33258）
• 3.6 流式细胞仪检测
• 3.7 总SOD 活力及MDA 含量的测定
• 3.8 统计学处理
• 第4章 实验结果
• 4.1 DHA, EPA 对人肝癌细胞HepG2 的细胞毒作用
• 4.2 DHA，EPA 和5-FU 对人肝癌细胞HepG2 的联合细胞毒作用
• 4.3 EPA 和DHA 对人肝癌细胞HepG2 细胞核影响（Hochest33258）
• 4.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率
• 4.5 EPA 和DHA 对人肝癌细胞HepG2 总SOD 活力和MDA 含量的影响
• 第5章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 缩略语词汇表
• 附录 图片
• 致谢
• 攻读硕士学位期间的研究成果