超声联合LHRHa-靶向微泡沉默Survivin基因对卵巢癌A2780/DDP细胞侵袭及转移能力的影响

论文摘要

第一部分凋亡抑制基因Survivin在卵巢癌细胞中的表达目的：测定Survivin蛋白在三种卵巢癌细胞系中的表达，选择其中Survivin表达较高的细胞系进入后续部分的实验。方法：引入三种卵巢癌细胞系：A2780/DDP、SKOV3、HO8910，分别进行体外培养。通过免疫荧光技术定性、Western-blot方法定量测定Survivin蛋白的表达水平。结果：①免疫荧光测定结果:以各种细胞系中荧光细胞发生率做比较，HO8910、SKOV3、 A2780/DDP三种细胞系的荧光细胞发生率分别为75.34%±2.52%、74.77%±2.65%、81.04%±2.12%；②Western-blot测定结果：以各种细胞系中Survivin/β-actin做比较，HO8910、SKOV3、 A2780/DDP三种细胞系的比值分别为0.624±0.028、0.638±0.029、0.702±0.017。综上，HO8910细胞系和SKOV3细胞系的Survivin蛋白表达量差别不大（P>0.05）；A2780/DDP细胞系的Survivin蛋白表达量较前两者高（P<0.05）。结论：HO8910、SKOV3、A2780/DDP细胞系均有Survivin蛋白高表达，A2780/DDP表达量更高，该细胞株适合进行Survivin基因靶向沉默研究。第二部分超声联合LHRHa-靶向微泡介导psh-Survivin转染对卵巢癌A2780/DDP细胞侵袭及转移能力的影响目的：通过超声破坏LHRHa-靶向微泡转染pshRNA-Survivin，观察RNA干扰对人卵巢癌A2780/DDP细胞survivin基因的沉默效应及对细胞侵袭转移能力的影响。方法：构建靶向survivin基因的短发夹状RNA重组表达质粒pshRNA-Survivin。将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为7组：空白对照组、单纯质粒组、质粒+普通微泡组、质粒+靶向微泡组、质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组及质粒+靶向微泡+超声辐照组。分别给予相应处理，应用western-blot检测survivin蛋白的表达；MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质粘附能力；利用transwell小室检测卵巢癌细胞侵袭转移能力；western-blot检测细胞中MMP-2、E-cadherin蛋白表达。结果：①与对照组比较，质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组、质粒+靶向微泡+超声辐照组survivin蛋白明显降低（p<0.05），穿透重组基质膜数目明显降低（p<0.05），细胞中MMP-2蛋白表达明显下降（p<0.05），E-cadherin蛋白表达明显增强（p<0.05）。其中质粒+LHRHa-靶向微泡+超声辐照组survivin、MMP-2蛋白表达量，穿透重组基质膜数目明显低于质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡组+超声辐照组，而细胞E-cadherin蛋白表达明显高于质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组（p<0.05）。②与对照组比较，质粒+普通微泡+超声辐照组、质粒+LHRHa-靶向微泡+超声辐照组细胞粘附能力明显降低（p<0.05）；质粒+靶向微泡+超声辐照组细胞粘附能力明显低于质粒+普通微泡+超声辐照组（p<0.05）。结论：超声破坏LHRHa-靶向微泡可有效增强pshRNA-Survivin对卵巢癌A2780/DDP细胞Survivin的靶向沉默效应，并降低其侵袭转移能力，可望为卵巢癌提供一种有效的辅助治疗方法。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 凋亡抑制基因Survivin在卵巢癌细胞系中的表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 第二部分 超声联合LHRHa-靶向微泡介导psh-Survivin转染及对卵巢癌 A2780/DDP细胞侵袭转移能力的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表的论文及参研基金情况