桑黄巨原生质体生物学特性及其功能性研究

论文摘要

本实验以桑黄为实验材料分两个方面进行研究。第一方面主要对桑黄的生物学特性进行研究,主要研究巨原生质体的分离、再生条件以及其显微和亚显微结构的差别。实验结果表明:桑黄在3%的溶壁酶的作用下,37℃酶解7天即可获得大量的巨原生质体,直径在（15±1.7）μm;接种在再生培养基上,25℃培养11天后,即萌发出幼嫩的菌丝;透射电镜发现,桑黄巨原生质体的细胞结构有很大的变化。首先,酶解时间的延长对细胞结构有一定的破坏作用,细胞膜出现部分缺口。其次,巨原生质体最显著的特征就是液泡体积明显增大。最后,与普通原生质体相比,巨原生质体线粒体的数目和体积也有相应的增多和变大,在本实验中未发现细胞核增多这个现象。第二方面主要研究桑黄多糖的分离、纯化和生物学活性。桑黄子实体经过热水提取,减压浓缩,酒精沉淀,脱蛋白,乙醚、丙酮洗涤,真空干燥,得到桑黄水溶性粗多糖,经透析,SephadexG-200柱层析分离纯化得到桑黄水溶性多糖纯品PIPS1和PIPS2。两者经柱层析鉴定均为单一对称峰,醋酸纤维薄膜电泳以及聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳均为单一条带。根据洗脱体积与分子量的对数呈线性关系,本实验测得PIPS1的分子量为4.7×105KD,PIPS2的分子量为8.6×104KD。经过提取纯化的多糖具有良好的生物学活性,能够提高机体内细胞因子IL-2的表达;能够提高机体抗氧化酶的活性,提高机体清除自由基的能力,减轻自由基对机体的损伤,能够改善肝脏局部的微循环,及时修复损伤的肝细胞,减少谷草、谷丙转氨酶向血中的释放,对CCl4引起的化学性肝损伤具有很好的保护作用;本研究中,桑黄多糖还初步显示对高脂饲料引起的脂肪肝具有一定的抑制作用,主要是通过降低胆固醇和甘油三酯,提高高密度脂蛋白的表达来实现;体外抗肿瘤实验发现,桑黄多糖对体外培养的宫颈癌细胞具有很明显的抑制效果,表现出良好的细胞毒性作用,对肝癌细胞的生长也有一定的抑制作用。以上结果均说明,桑黄多糖具有良好的生物学活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章：桑黄巨原生质体生物学特性研究
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 参考文献
• 第二章：桑黄多糖的分离纯化
• 一、材料、试剂和仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 参考文献
• 第三章：桑黄提取物对正常小鼠体内IL-2表达的影响
• 一、材料、仪器和方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 参考文献
• 第四章：桑黄提取物对急性化学性肝损伤的作用研究
• 一、实验材料
• 二、分析方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 参考文献
• 第五章：桑黄提取物预防脂肪肝的实验研究
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 参考文献
• 第六章：桑黄体外抗氧化实验研究
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 参考文献
• 第七章：桑黄体外抗肿瘤实验研究
• 一、材料和方法：
• 二、结果
• 三：讨论
• 参考文献
• 附录：科研论文
• 致谢信