STAT3和SOCS3表达对人肝细胞癌恶性演进作用及其机制的研究

论文摘要

目的:检测人肝细胞癌和癌旁非肿瘤病变组织中STAT3、SOCS3、Ki67和VEGF的表达,并观察STAT3和SOCS3与肝细胞癌临床病理特征和患者预后的关系,探讨STAT3和SOCS3与临床肝细胞癌发生和演进的相关性及其临床意义。方法:构建组织微阵列平台,应用免疫组织化学S-P法检测140例肝细胞癌和112例癌旁非肿瘤组织pSTAT3、SOCS3、Ki67和VEGF蛋白的表达,原位分子杂交技术检测STAT3 mRNA的表达。结果:1. 140例肝细胞癌和112例癌旁非肿瘤组织的微阵列样本中,2例含有过少或不含有肿瘤组织,2例样本在切片、免疫组化或原位杂交染色过程中脱失,成品率为98.4%。2.肝细胞癌组织中pSTAT3蛋白和STAT3 mRNA表达均较癌旁非肿瘤组织显著增强（均P<0.001）,而肝细胞癌SOCS3蛋白表达较癌旁非肿瘤组织明显降低（P<0.001）。3.肝细胞癌组织pSTAT3蛋白表达与肿瘤大小、临床分期,Ki67增殖指数和VEGF表达均呈显著正相关（均P <0.01）,并且其表达与患者总生存期和无病生存期均呈显著负相关（均P<0.05）;而SOCS3蛋白表达与肿瘤Ki67增殖指数和VEGF表达均呈显著负相关（均P <0.01）,并且与患者总生存期和无病生存期均呈显著正相关（均P<0.05）。4.相关性分析显示,肝细胞癌组织pSTAT3蛋白表达与STAT3 mRNA表达呈显著正相关（rs = 0.726,P < 0.001）,而与SOCS3蛋白表达呈显著负相关（rs = - 0.606,P < 0.001）。结论: STAT3和SOCS3表达的失调可能与肝细胞癌发生过程有关。pSTAT3表达与肝细胞癌病情演进密切相关,pSTAT3和SOCS3是辅助判断肝细胞癌患者预后的有效标志物。目的:观察瞬时转染特异性siRNA后分别对人肝癌细胞STAT3和SOCS3的表达,探讨STAT3和SOCS3对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及分子机制。方法:以人肝癌细胞系HepG2的为研究对象,使用lipo2000分别瞬时转染特异性靶向STAT3 siRNA和SOCS3 siRNA,0、24、48、72小时后用MTS法检测siRNA组和阴性对照组增殖活性;使用“划痕愈合实验”分别0、36、72小时检测不同组别肝癌细胞迁移率;使用“Transwell小室实验”分别24和36小时检测不同组别肝癌细胞迁移和侵袭情况。结果:1、STAT3的siRNA组与对照组相比细胞增殖活性明显受到抑制（P<0.01）,而SOCS3的siRNA组较对照组的细胞增殖活性显著增加;2、STAT3的siRNA组“划痕愈合”较对照组减慢（P<0.01）,而SOCS3的siRNA组“划痕愈合”较对照组加快（P<0.01）;3、“Transwell小室”实验显示STAT3的siRNA组肝癌细胞迁移和侵袭力较对照组显著减弱（P<0.01）,而SOCS3的siRNA组较对照组迁移和侵袭力显著增强（P<0.01）。4、STAT3的siRNA组肝癌细胞的MMP-2、MMP-9和c-myc表达较对照组显著下调,而SOCS3的siRNA组肝癌细胞的相关指标表达较对照组显著上调。结论:STAT3和SOCS3在肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的过程中可能发挥了重要作用,这种调控作用可能是通过调控MMP-2、MMP-9和c-myc途径发挥作用。目的:通过体内实验观察JAK/STAT3信号通路阻断剂AG490对肝细胞癌裸鼠移植瘤生长、侵袭和转移等生物学行为的影响,从体内实验的角度探讨阻断STAT3通路对肝细胞癌生长、侵袭转移等的抑制作用,以及对相关重要基因的影响。以期对临床肝细胞癌的治疗提供一定的理论依据。方法:建立人肝癌细胞系HepG2细胞裸鼠异种移植瘤模型并分组。使用AG490、顺铂或生理盐水处理各组裸鼠。用药期间连续测量裸鼠肿瘤体积,检测肿瘤重量并计算抑瘤率。HE染色检测肿瘤局部侵袭和肺脏转移情况。免疫组织化学检测移植瘤组织中pSTAT3、SOCS3、Ki67、c-myc、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果:1、药物对裸鼠移植瘤体积生长的影响:分别在用药后第1天、第4天、第7天及第10天测量肿瘤长径（a）、短径（b）,计算体积,描绘移植瘤生长曲线图。结果可见从用药第7天开始AG490给药组肿瘤体积显著小于对照组（P < 0.001）。2、药物对裸鼠移植瘤肿瘤细胞局部侵袭和转移的生物学的影响:肉眼观移植瘤呈结节状,肿瘤组织血供丰富,给药组移植瘤境界清楚,无明显周围组织和皮肤浸润,易分离,切面呈鱼肉样。光镜下观察给药组肿瘤细胞较对照组局部侵袭力明显减弱,肺部转移率明显减少。3、免疫组化结果:给药组移植瘤肿瘤细胞pSTAT3、Ki67、c-myc、MMP-2和MMP-9蛋白表达较对照组明显降低,而SOCS3表达给药组明显高于对照组。结论:AG490能够通过抑制STAT3通路抑制人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长、侵袭和转移,并且可以抑制肿瘤细胞Ki67、c-myc、MMP-2和MMP-9蛋白表达,提示在体内,STAT3/SOCS3通路在肝细胞癌恶性演进过程中发挥了重要作用。

论文目录

• 英文缩略词表
• 前言
• 第一部分 STAT3 和 SOCS3 在肝细胞癌组织中的表达及临床意义
• 第二部分 STAT3和SOCS3对肝癌细胞增殖、侵袭迁移等生物学行为的影响和机制
• 第三部分 AG490靶向性阻断STAT3信号通路抑制人肝癌细胞生长和侵袭的体内 研究
• 第一部分
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分
• 前言
• 摘要
• Abstract
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分
• 前言
• 摘要
• Abstract
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 简历
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 附件