泡菜中蛔虫卵分子鉴定技术研究

论文摘要

为了防止类似2005年输韩泡菜事件的再次发生,为我国进出口泡菜及相关产品的检验检疫提供技术支持,我们进行了泡菜及相关产品中寄生虫卵分离方法的研究和蛔虫卵的回收率试验。建立了包括0.5%SDS溶液洗脱、过滤、离心沉淀、饱和食盐水溶液漂浮、麦克马斯特氏(McMaster)虫卵计数板观察计数等一系列程序的虫卵检验操作规程。结果表明:蛔虫卵的回收率为35.1%。为了精确地对从泡菜及相关产品中发现的寄生虫卵进行种类鉴定,同时与植物本身的线虫卵进行区别,我们在上述研究的基础上,以污染泡菜风险最高的蛔虫卵作为检测目标,进行了模拟阳性泡菜样品中携带蛔虫卵的荧光PCR检测技术研究,即以猪蛔虫基因组DNA为模板,建立了蛔虫特异性荧光PCR检测方法。其中包括对猪蛔虫卵不同破壳处理方式的比较、液氮/37℃反复冻融蛔虫卵的前处理方式、单蛔虫卵的荧光PCR检测技术等;并制备了蛔虫目的基因重组质粒。结果表明:上述处理方法和分子鉴定检验技术完全适用于生产泡菜中蛔虫卵的检测使用。

论文目录

• 文献综述部分
• 1 人畜寄生虫病的危害
• 1.1 人蛔虫流行情况
• 1.2 猪蛔虫感染现状与危害
• 2 食源性寄生虫与食品安全
• 3 寄生虫虫卵及虫体的检测与种类鉴定技术
• 3.1 粪便检查与幼虫培养
• 3.2 分子生物学技术的应用
• 4 荧光定量 PCR 技术及其在动物疾病病原体检测诊断上的应用
• 4.1 荧光PCR 的分类
• 4.1.1 染料法
• 4.1.2 探针法
• 4.2 实时荧光 PCR 的特点和优点
• 4.3 FQ-PCR 在动物疾病病原体基因检测和鉴定上的应用
• 4.3.1 病毒的检测与鉴定
• 4.3.2 细菌的检测与鉴定
• 4.3.3 在寄生虫病诊断上的应用
• 4.3.4 在其它方面的应用
• 实验部分
• 研究一 蛔虫荧光 PCR 种类鉴定方法的建立
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 方法
• 1.2 结果和分析
• 1.2.1 荧光PCR 反应条件的优化
• 1.2.2 灵敏度检测
• 1.2.3 特异性检测
• 1.3 讨论
• 研究二 单蛔虫卵荧光 PCR 检测方法的建立
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果和分析
• 2.2.1 蛔虫卵的预处理方法比较
• 2.2.2 敏感性试验
• 2.2.3 特异性实验
• 2.3 讨论
• 研究三 泡菜及相关产品中寄生虫卵的分离
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果和分析
• 3.2.1 虫卵回收率
• 3.2.2 模拟样品中虫卵的检测结果
• 3.2.3 讨论
• 研究四 猪蛔虫阳性模板基因的克隆
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果和分析
• 4.2.1 PCR 扩增产物电泳
• 4.2.2 阳性克隆的 PCR 鉴定
• 4.2.3 重组质粒序列鉴定
• 4.3 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介