表阿霉素与白藜芦醇联合用药对多种人类肿瘤细胞的作用

论文摘要

恶性肿瘤的治疗是一个世界性的难题,联合用药是提高肿瘤治疗效果的途径之一。本文研究了表阿霉素与白藜芦醇联合用药在体外对提高肿瘤细胞抑制率的影响。白藜芦醇是一种主要存在于葡萄中的天然分子,具有多种生物学效应,如抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗炎症以及降低血糖等。它对肿瘤的发生、促进和发展三个阶段都有明显的抑制作用。表阿霉素是多种癌症的临床一线用药,它是一种细胞周期非特异性的药物,其主要作用部位是细胞核。表阿霉素能迅速透入到体外培养的细胞胞内,进入细胞核与DNA结合,从而抑制核酸的合成和有丝分裂。目前关于表阿霉素与白藜芦醇联合用药作用的研究极少,缺乏针对多种常见肿瘤的相关研究。为评价表阿霉素与白藜芦醇联合用药对多种肿瘤细胞协同抑制作用,本文以人胶质瘤细胞系A172和T98G、人肺癌细胞系H838、人宫颈癌细胞系Hela、人肝癌细胞系HepG2、人乳腺癌细胞系MCF7、人胃癌细胞系MGC803和人正常肝细胞系L02为对象,研究了表阿霉素与白藜芦醇单独及联合用药对上述细胞系的抑制作用。通过显微镜观察单独及联合用药处理后MCF7和MGC803细胞形态的改变,流式分析细胞周期分布,初步探讨了表阿霉素与白藜芦醇联合用药的作用机制。为研究单独及联合用药对细胞的抑制情况,本文实验以上述8种肿瘤细胞系为实验对象,采用浓度依次为25uM、50uM、100uM、200uM和400uM的白藜芦醇与浓度依次为0.1uM、luM、5uM、10uM和20uM的表阿霉素单独给药,分别得到两种药物单独给药时对8种细胞系抑制作用的剂量反应曲线。其次,用浓度为luM的表阿霉素与浓度分别为25uM、50uM和100uM的白藜芦醇联合用药,MTS法检测药物处理对细胞增殖的抑制,观察联合用药的增效作用。细胞形态变化可通过光学显微镜进行观察；碘化丙啶(Propidium iodide, PI)单染法可以通过荧光显微镜直接观察到发生凋亡或坏死细胞。由于表阿霉素与白藜芦醇都与细胞周期抑制有关,本实验同时采用流式细胞术检测细胞周期分布变化,评估单独及联合用药后细胞周期的变化。实验结果表明不同剂量的表阿霉素与白藜芦醇单独给药时,对上述各种细胞系均有抑制作用,在本实验所用剂量范围内,抑制率与浓度成正相关效应。联合用药对MCF7和MGC803细胞协同抑制效果明显,luM的表阿霉素单独给药对MCF7细胞的抑制率为33%,25uM的白藜芦醇单独给药对MCF7细胞的抑制率为7%,而联合用药对MCF7细胞的抑制率为63%,远高于单独给药抑制率的加和(P<0.01)。在MGC803细胞系中也观察到了类似的协同抑制效果。进一步选取MCF7和MGC803细胞系进行了形态观察和细胞周期实验：光学和荧光显微镜观察对照组和白藜芦醇处理组细胞形态基本正常,白藜芦醇处理组细胞出现轻微凋亡,而表阿霉素处理组和联合用药组细胞形态异常,并出现大量凋亡及坏死细胞。流式结果显示白藜芦醇主要将细胞抑制在S期,而表阿霉素对细胞各周期都有抑制作用,主要将细胞抑制在G2/M期,联合用药组细胞出现大量凋亡或坏死,处于正常生命周期中的细胞比例减少。本课题在体外评价了表阿霉素与白藜芦醇的联合用药对多种人类肿瘤细胞的抑制作用,发现其对人乳腺癌细胞系MCF7和人胃癌细胞系MGC803有明显的协同抑制效果,可明显提高对这两种肿瘤细胞的抑制率。该结果提示表阿霉素与白藜芦醇的联合用药是一种值得探索的化疗方案,可能在治疗乳腺癌和胃癌的动物模型上也会有明显的抑瘤效果,同时推测该方案可能在临床应用方面,尤其是在提高乳腺癌和胃癌的治疗效果方面具有潜在的应用价值。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 表阿霉素与白藜芦醇的基本性质
• 1.2 细胞抑制实验体外评估方法
• 1.3 表阿霉素与白藜芦醇联合用药的现有研究状况
• 1.4 本课题的研究思路及方法
• 第二章 实验材料、方法和技术路线
• 2.1 细胞生长曲线的测定
• 2.2 细胞形态观察
• 2.3 流式细胞术检测细胞周期
• 2.4 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 药物对细胞的抑制效果
• 3.2 细胞形态学观察
• 3.3 药物处理后细胞周期的抑制情况
• 第四章 分析讨论
• 4.1 MTS试剂效果评价
• 4.2 单独给药与联合用药对细胞形态的影响
• 4.3 单独给药与联合用药对细胞周期的影响
• 4.4 不同细胞系对药物敏感度分析
• 第五章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 参考文献