杜仲木脂素对AngⅡ诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质合成的影响

论文摘要

目的：研究杜仲木脂素对血管紧张素II（Ang II）诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质合成的影响,阐明杜仲木脂素保护高血压肾损害的具体机制。方法：采用大鼠肾小球系膜(HBZY-1.细胞,实验分为7组：对照组、Ang II诱导组（10-8mol／L Ang II）.依帕司他组（10-8mol／L Ang II+20gmol／L依帕司他）、氯沙坦组（10-8mol／LAng II+20μmol/L氯沙坦）、低浓度杜仲木脂素组（10-8mol／L Ang II+20mg／L杜仲木脂素）、中浓度杜仲木脂素组（10-8mol／L Ang II+40mg／L杜仲木脂素）和高浓度杜仲木脂素组（10-8mol／L Ang II+80mg／L杜仲木脂素）。各组细胞在含1%新生牛血清培养基中孵育48h,采用MTT一步法检测A490值来评估细胞数；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法和蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞外基质Ⅰ型胶原蛋白（Col I）.III型胶原蛋白（Col III.）.Ⅳ胶原蛋白(Col IV..纤连蛋白（FN）以及醛糖还原酶（AR）的mRNA和蛋白表达水平。结果：（1）与对照组相比,10-8mol／L Ang II组细胞数增加,差异具有统计学意义（1.76±0.06vs1.67±0.05,P<0.05）.与Ang II组比较,氯沙坦组（1.63±0.04vs1.76±0.06,P<0.01）.依帕司他组（1.65±0.04vs1.76±0.06,P<0.01）和不同浓度木脂素组（1.68±0.05,1.58±0.07,1.59±0.07vs1.76±0.06,P<0.05,P<0.01,P<0.01）细胞数减少,差异具有统计学意义。（2）与对照组相比,10-8mol／L Ang II能够显著增加Col IV （2.33±0.13vs1.00±0.31,P<0.01）.FN（1.17±0.04vs1.00±0.08,P<0.01）.ColI（1.36±0.05vs1.00±0.05,P<0.01）.Col III（1.31±0.03vs1.00±0.04,P<0.01）和AR(1.35±0.04vs1.00±0.11,P<0.01.mRNA水平。与Ang II组相比,氯沙坦可明显降低Col IV（1.28±0.09vs2.33±0.13,P<0.01）.FN（0.79±0.03vs1.17±0.04,P<0.01）.Col I（1.07±0.11vs1.36±0.05,P<0.01）.Col III(1.11±0.04vs1.31±0.03, P<0.011和／R（1.22±0.03vs1.35±0.04,P<0.05）mRNA水平,差异具有统计学意义。与Ang II组比较,低中高浓度木脂素均显著降低FN（0.86±0.06,0.90±0.03,0.67±0.01vs1.17±0.04,P<0.01）.Col I（0.75±O.01,0.67±0.05,0.55±0.01vs1.36±0.05,P<0.01）.ColIII（0.78±0.07,0.34±0.02,0.18±0.01vs1.31±0.03,P<0.01）和AR （1.08±0.03,0.98±0.09,0.86±0.08vs1.35±0.04,P<0.01） mRNA水平,差异具有统计学意义；高浓度木脂素组显著减少Col IV mRNA（1.51±0.21vs2.33±0.13,P<0.01）水平,差异具有统计学意义,低中浓度木脂素组（1.76±0.77,1.66±0.62vs2.33±0.13,P=0.084,P=0.134）具有降低趋势,但差异无统计学意义。与Ang II组相比,依帕司他组FN（0.76±0.03vs1.17±0.04,P<0.01）.ColI（1.25±0.05vs1.36±0.05,P<0.05）和Col III （0.68±0.02vs1.31±0.03,P<0.01）mRNA水平明显下降,差异具有统计学意义；AR（3.78±0.13vs1.35±0.04,P<0.01）,差异具有统计学意义；Col IV（2.54±0.14vs2.33±0.13,P=0.275）mRNA水平上升,但差异不具有统计学意义。（3）与对照组相比,10-8mol／L Ang II能够显著增加Col IV（2.18±0.26vs1.00±0.02,P<0.01）.FN（2.43±0.03vs1.00±0.07,P<0.01）.Col I（1.29±0.05vs1.00±0.04,P<0.01）.Col III（5.08±0.21vs1.00±0.43,P<0.01）和AR(2.02±0.08vs1.00±0.08,P<0.01.蛋白水平。与Ang II组相比,氯沙坦组Col Ⅳ（0.47±0.15vs2.18±0.26,P<0.01）.FN（0.17±0.01vs2.43±0.03,P<0.01）.Col I（0.47±0.02vs1.29±0.05,P<0.01）.Col III（0.91±0.36vs5.08±0.21,P<0.01）和AR（0.35±0.15vs2.02±0.08,P<0.01）蛋白水平降低,差异具有统计学意义。与Ang II组比较,低中高浓度木脂素均显著降低ColIV（1.71±0.07,1.58±0.08,0.50±0.14vs2.18±0.26,P<0.05.P<0.01.P<0.01）. FN（0.19±0.09,0.40±0.12,0.20±0.10vs2.43±0.03,P<0.01）. Col I（0.76±0.01,0.71±0.02,0.66±0.02vs1.29±0.05,P<0.01）.ColIII（2.78±0.21,1.94±0.37,1.44±0.39vs5.08±0.21, P<0.01）和AR（0.52±0.17,0.66±0.22,0.45±0.23vs2.02±0.08,P<0.01）蛋白水平,差异具有统计学意义。与Ang Ⅱ组相比,依帕司他组FN（2.07±0.06vs2.43±0.03,P<0.01）、ColⅠ（1.07±0.02vs1.29±0.05,P<0.01）和Col Ⅲ（1.12±0.46vs5.08±0.21,P<0.01）蛋白水平下降,差异具有统计学意义；Col Ⅳ（2.71±0.42vs2.18±0.26,P<0.01）和AR（3.13±0.24vs2.02±0.08,P<0.01）蛋白水平上升,差异具有统计学意义。结论：（1）Ang Ⅱ促进HBZY-1中Col Ⅲ和AR表达,氯沙坦对Ang Ⅱ诱导的Col Ⅲ和AR表达具有抑制作用。（2）木脂素能拮抗Ang Ⅱ诱导的HBZY-1增殖和细胞外基质成分（Col Ⅳ、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ）及AR的表达。（3）依帕司他能够抑制Ang Ⅱ诱导的HBZY-1增殖和细胞外基质成分（FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ）表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 试剂及仪器
• 2.2 大鼠肾小球系膜细胞培养
• 2.3 实验设计及方法
• 2.3.1 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导HBZY-1增殖的影响
• 2.3.2 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导细胞外基质成分和AR mRNA表达的作用
• 2.3.3 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导细胞外基质成分和AR蛋白表达的作用
• 2.4 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的HBZY-1增殖的影响
• 3.1.1 不同浓度杜仲木脂素对HBZY-1生长的影响
• 3.1.2 不同浓度Ang Ⅱ对HBZY-1生长的影响
• 3.1.3 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的HBZY-1增殖的影响
• 3.2 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导细胞外基质成分和AR表达的影响
• 3.2.1 PCR最佳退火温度
• 3.2.2 扩增效率
• 3.2.3 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的细胞外基质成分和AR mRNA表达的影响
• 3.2.4 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的细胞外基质成分和AR蛋白表达的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间的研究成果