固相合成睡眠肽及成骨生长肽的研究

论文摘要

本文首先对多肽的一些内容进行了简单介绍,包括多肽的概念、多肽的合成发展史、多肽的各种制备方法、基本原理、国内外研究现状、及其分析纯化方法和研究意义。主要研究了睡眠肽和成骨生长肽的Fmoc法固相合成及分离纯化,固相合成中系统地研究了树脂类型、保护基、缩合时间、反应溶剂、缩合剂、偶连率的测定方法和树脂切割条件对合成质量的影响,确立了最佳的工艺条件为:以DMF为反应溶剂,TBTU为缩合剂,TFA:对甲基苯酚:EDT:水为97:0.25:0.25:2.5(V/V)的切割液配制条件,3倍过量投料进行缩合反应,反应时间为3hr。此反应条件能够成功的合成睡眠肽和成骨生长肽。通过对睡眠肽和成骨生长肽的分离纯化研究,确立了纯化工艺为:先用凝胶色谱柱纯化,纯化后产品的纯度提高到60%,再以反相高效液相制备层析进行最终纯化,最终纯化结果纯度达到95%以上。此外,本文的其中一个目的是在原睡眠肽序列的基础上,引入了一段氨基酸序列,希望能够具有增强其穿透细胞膜作用,并进行了其生物活性测试。但是从测试结果看,没有明显的效果,成骨生长肽的穿膜活性实验因为时间有限,没有来得及做,下一步将继续测试其穿膜活性。论述了在合成这段序列过程中遇到的问题,并对其进行了分析,对后面的工作提出了一些建议。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 多肽的概念和性质
• 1.2 多肽合成的发展史
• 1.3 多肽制备的基本方法
• 1.4 固相合成多肽的原理
• 1.5 Fmoc固相合成中的偶连方法
• 1.6 合成多肽的国内外研究发展现状
• 1.7 多肽的分离纯化
• 1.8 多肽的分析方法
• 1.9 多肽合成的研究意义
• 2 睡眠肽的合成及纯化
• 2.1 前言
• 2.2 仪器和设备
• 2.3 试剂
• 2.4 实验装置图
• 2.5 睡眠肽合成实验方案
• 2.6 睡眠肽的质谱检测
• 2.7 睡眠肽的分离纯化
• 3 增强睡眠肽的穿膜性及活性实验
• 3.1 前言
• 3.2 仪器和设备
• 3.3 试剂
• 3.4 合成装置图
• 3.5 合成实验
• 3.6 活性实验
• 4 成骨生长肽的合成及纯化
• 4.1 前言
• 4.2 仪器和设备
• 4.3 试剂
• 4.4 实验装置图
• 4.5 成骨生长肽的合成实验
• 4.6 成骨生长肽的定性检测
• 4.7 成骨生长肽的分离纯化
• 5 实验结果与讨论
• 5.1 树脂的选择及活化
• 5.2 多肽合成中保护基的选择
• 5.3 连结第一个氨基酸到树脂
• 5.4 偶连率的测定
• 5.5 连结第二个氨基酸到最后一个氨基酸
• 5.6 多肽合成中裂解液的选择
• 5.7 多肽合成结果的定性表征
• 5.8 HPLC分析及纯化合成多肽
• 5.9 活性实验结论
• 6 结论与建议
• 6.1 结论
• 6.2 对今后工作的建议
• 致谢
• 攻读硕士期间主要工作成果
• 参考文献