论文摘要
目的:研究热休克蛋白HSP90以及HBP21在ARPE19细胞中的表达及二者之间的相互作用,并进一步探讨了HSP90与HBP21相互作用的位点。方法:首先,通过RT-PCR研究生理状态下二者在ARPE19细胞中的表达。然后构建PGBKT7-HBP21的诱饵基因,进行酵母双杂交发现HSP90与HBP21之间存在相互作用,再诱导6His-HSP90蛋白以及GST-HBP21融合蛋白,通过GST Pull-Down进一步验证二者之间的相互作用。此外还通过构建不同片段的HSP90及HBP21载体进行实验,研究其具体作用位点。结果:生理状态下,在人的RPE细胞中两者都有一定水平的表达。通过酵母双杂交和GSTPull-Down证实HSP90与HBP21可以相互作用,不同片段的HSP90与HBP21的相互作用表明HBP21通过其三联TPR结构域与HSP90的C端结构域发生相互作用。结论:HSP90是热休克蛋白家族中的主要成员,具有广泛的生理功能,可参与调节多种蛋白质在非应激条件下的生物活性。然而,对HSP90的胞内作用底物以及细胞中调节因子的有无,只有框架性的了解。我们克隆了一个新的TPR蛋白HBP21,从线虫到小鼠中都发现类似蛋白的表达,然其具体生物学功能尚无详细研究。本研究通过酵母双杂交和GST Pull-Down证实HSP90与HBP21之间可以发生相互作用,且其作用位点为三联TPR结构域及HSP90的C端结构域。RT-PCR表明生理状态下,人RPE细胞中两者都有一定水平的表达。本研究为进一步研究HBP21这个新基因的功能奠定了基础,并且二者在RPE细胞中的表达说明其相互作用可能对RPE增生相关眼病的生理病理过程产生影响。
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标签：蛋白论文; 视网膜色素上皮细胞论文;