论文摘要
猕猴桃(Kiwifruit)属猕猴桃科,落叶木质藤本,在我国分布广泛。猕猴桃的根或根皮含有多糖及苷类,萜类成分,鞣质,甾体、黄酮类等化学成分,具有健胃、清热、解毒、利湿、祛风的作用。因此,对猕猴桃根重要活性成分进行提取分离纯化工艺的研究以及对各提取物进行保肝功能的评价具有十分重要的意义。本文以产自湘西凤凰的野生猕猴桃根和人工种植的“米良一号”猕猴桃根为原料,对其中多糖和熊果酸的提取、分离纯化工艺进行研究,并且对两种提取物进行保肝功能的比较研究,主要研究结果如下:1.采用三元二次通用旋转法,确定野生猕猴桃根中多糖微波水提工艺最优条件为固液比(g:mL)1.8:30,萃取温度61.5℃,萃取时间33.5 min,在此条件下,多糖的理论得率为12.34%,实际得率为12.34±0.01%,RSD=1.28%(n=5)。2.对野生猕猴桃根粗提物进行初步纯化后,二乙基氨基(DEAE)纤维素柱层析纯化的结果表明以0.1~1.0mol/L的NaCl溶液为洗脱剂的多糖洗脱效果最佳。在此条件下,控制流速1.2mL/min将猕猴桃根粗多糖进一步纯化得到三个组分PK1、PK2和PK3,多糖得率分别为62.87%、8.24%、15.39%。通过理化性质鉴定反应以及紫外光谱分析的结果表明经DEAE-纤维素柱层析的猕猴桃根多糖PK1、PK2和PK3组分中含量均达到90%以上,其中PKl组成均一,符合国家中药新药的要求。3.采用四元二次回归通用旋转法,确定野生猕猴桃根中熊果酸的微波提取工艺最优条件为:乙醇浓度72.8%,固液比(g:mL)为4.2:25,萃取时间18.9 min,萃取温度90.0℃,熊果酸微波萃取的理论得率为5.68%,验证实验值为5.66±0.01%,RSD=1.43%(n=5)。4.通过薄层层析(TLC)实验研究发现,熊果酸经过乙酸乙酯萃取后可以达到初步纯化的目的,然后经真空浓缩可以得到熊果酸粗粉。通过对硅胶柱层析的洗脱溶剂的配比、硅胶粒径大小的研究发现,在氯仿与甲醇的配比为18:1,粒径为100-200目时,熊果酸的纯度最高,达到85%以上,而且提取率也在65%以上。5.以小白鼠为实验对象,以小鼠肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)的活力、丙二醛(MDA)的含量、血清中丙氨酸氨基转移酶(AST)以及天门冬氨酸氨基转移酶(ATL)的活性为测定指标,探讨野生和“米良一号”猕猴桃根的不同提取物对CCl4致小鼠肝损伤的保护作用。实验结果表明:与模型组比较,野生和“米良一号”猕猴桃根提取物各剂量组都有不同程度的保肝作用,其各自三种不同提取物的保肝效果顺序均为:粗三萜类化合物>水相粗提物>粗多糖。且野生猕猴桃根粗三萜类化合物的保肝效果要比“米良一号”猕猴桃根的好,存在着种属差异。从剂量上来说,’两种猕猴桃根的粗三萜类化合物剂量组中均以高剂量组的效果最好,其次是中剂量组,再次是低剂量组,即呈现一定的正相关。
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摘要ABSTRACT1 绪论1.1 猕猴桃概述1.1.1 猕猴桃的形态特征1.1.2 猕猴桃的资源分布与种植史1.1.3 猕猴桃的主要成分1.1.4 猕猴桃的作用1.2 猕猴桃根概述1.2.1 猕猴桃根的形态特征1.2.2 猕猴桃根的主要成分1.2.3 猕猴桃根及其活性成分的生理功效1.3 多糖研究概述1.3.1 多糖的生物活性1.3.2 多糖的分离纯化1.3.3 多糖的应用前景1.4 熊果酸研究概述1.4.1 熊果酸生物活性概述1.4.2 熊果酸的分离纯化1.4.3 熊果酸的纯度鉴定1.4.4 熊果酸的含量测定1.4.5 熊果酸的应用前景1.5 本课题研究的目的及意义2 猕猴桃根多糖微波萃取工艺研究2.1 材料与方法2.1.1 材料与试剂2.1.2 主要实验仪器2.1.3 实验方法2.1.4 数据处理方法2.2 结果与分析2.2.1 固液比对猕猴桃根多糖微波萃取的影响2.2.2 萃取温度对猕猴桃根多糖微波萃取的影响2.2.3 萃取时间对猕猴桃根多糖微波萃取的影响2.2.4 野生猕猴桃根多糖微波萃取三元二次回归通用旋转组合实验结果2.2.5 野生猕猴桃根多糖微波萃取工艺各因子交互作用曲面响应模型2.2.6 回归方程局部最优点的寻找2.2.7 野生猕猴桃根多糖微波萃取最优工艺验证实验结果2.2.8 野生猕猴桃根多糖微波萃取与热水浸提对比结果2.3 小结与讨论3 猕猴桃根多糖的纯化3.1 材料与方法3.1.1 材料与试剂3.1.2 主要实验仪器3.1.3 实验方法3.2 结果与分析3.2.1 猕猴桃根多糖的初步纯化3.2.2 纤维素阴离子交换剂DEAE-纤维素柱层析3.2.3 纯度鉴定3.3 结论4 猕猴桃根熊果酸微波萃取工艺研究4.1 材料与方法4.1.1 材料与试剂4.1.2 主要实验仪器4.1.3 实验方法4.1.4 数据处理方法4.2 结果与分析4.2.1 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取四元二次回归通用旋转组合实验结果4.2.2 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取工艺各因子及其交互作用影响分析结果4.2.3 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取最优工艺验证实验结果4.2.4 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取最优工艺验证实验结果4.3 小结与讨论5 硅胶柱层析分离纯化熊果酸5.1 材料与方法5.1.1 试剂与仪器5.1.2 实验方法5.2 结果与分析5.2.1 薄层层析实验结果5.2.2 粒径选择5.2.3 洗脱溶剂的确定5.2.4 纯化产物纯度检测5.3 结论6 猕猴桃根提取物对实验性肝损伤的保护作用6.1 材料与方法6.1.1 材料与试剂6.1.2 主要仪器6.1.3 实验方法6.1.4 统计方法6.2 结果与分析4对小鼠肝损伤的影响'>6.2.1 CCl4对小鼠肝损伤的影响4所致肝损伤小鼠SOD活力、MDA水平、AST、ALT水平的影响'>6.2.2 野生猕猴桃根提取物对CCl4所致肝损伤小鼠SOD活力、MDA水平、AST、ALT水平的影响4所致肝损伤小鼠SOD活力、MDA水平、AST、ALT水平的影响'>6.2.3 "米良一号"猕猴桃根提取物对CCl4所致肝损伤小鼠SOD活力、MDA水平、AST、ALT水平的影响4所致肝损伤小鼠的影响对比'>6.2.4 不同种属猕猴桃根提取物对CCl4所致肝损伤小鼠的影响对比6.3 小结与讨论7 结论与展望7.1 结论7.1.1 微波提取猕猴桃根多糖的最佳工艺7.1.2 猕猴桃根多糖的纯化以及理化性质7.1.3 微波提取猕猴桃根熊果酸的最佳工艺7.1.4 硅胶柱纯化猕猴桃根熊果酸7.1.5 猕猴桃根提取物对实验性肝损伤的保护作用7.2 展望参考文献附录致谢
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猕猴桃根活性成分的提取、分离纯化及其保肝功能评价的研究
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