论文摘要
本文研究了嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus,简称LA）,嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus,简称ST）,真空冷冻干燥制备菌粉及活菌制剂的工艺条件,重点对制备过程中在不同工艺流程添加的保护剂进行了研究。研究了2个菌株（种）的生长、繁殖和代谢规律,为制备活菌制剂打下基础。以培养时间为横坐标,相应的pH值、滴定酸度和菌落总数对数为纵坐标,测定2个菌株（种）的生长曲线。综合分析各生长曲线,确定嗜酸乳杆菌在5%接种量,37℃下最佳收获期为12～16h;嗜热链球菌在5%接种量,42℃下最佳收获期为16～20h。用无菌的乳酸溶液调节培养基的初始pH值分别为5.6、5.8和6.0,不同温度下培养,发现嗜酸乳杆菌的最佳培养条件:初始pH值5.8,37℃培养;嗜热链球菌的最佳培养条件:初始pH值5.6,42℃培养。选择4种天然廉价物料（添加剂）作为2个菌株（种）的促生因子,发现对其生长均有促进作用,影响大小依次为:西红柿汁5%＞香菇汁3%＞胡萝卜汁5%＞啤酒5%＞对照（LA）;啤酒5%＞西红柿汁5%＞香菇汁3%＞胡萝卜汁5%＞对照（ST）。在此基础上分别对2个菌株（种）冻干菌粉的工艺进行了研究。2个菌株（种）活菌计数均选择改良TJA固体培养基及双层平板法进行,测得的活菌数最大;离心条件均选择10min,7000 rad/min;冷冻干燥保护剂均选择脱脂奶粉10%+乳糖6%。冷冻后对冻干菌粉分别进行检定结果如下:镜检革兰氏阳性无杂菌,冻干菌粉含水率≤3%,活菌存活率LA为69.33%,ST为73.59%。对嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌活菌制剂的工艺进行了研究。为提高2个菌株（种）活菌制剂的活菌存活率,提高片剂质量,延长有效期,分别选择2个菌株（种）在制备过程中的不同工艺流程加入保护剂,并对保护剂配方进行优化。首先利用Plackett-Burman（PB）设计法,筛选出嗜酸乳杆菌在发酵培养及制剂压片2个工艺流程中分别加入保护剂时,影响其活菌存活率的重要因素;接着利用均匀设计法对筛选出的重要因素的最优水平进行确定。在利用PB法相关公式计算并筛选出重要因素的基础上,利用DPS软件对均匀设计数据进行二次多项式逐步回归,进一步得到含有重要因素的回归方程,求y的极值与相应各个因素的对应值,从而确定各因素的最优水平,得到保护剂的配方。嗜热链球菌保护剂配方确定方法同上。共得到4组保护剂的配方,LA发酵培养保护剂:当氯化钠0.3%,甘露醇0.4%,麦芽糖3.5%时,活菌存活率y1max=93.1695%;LA制剂压片保护剂:当抗坏血酸1.0%,蔗糖37.0%时,活菌存活率y2max=97.0612%;ST发酵培养保护剂:当蔗糖0.5%,可溶性淀粉3.5%时,活菌存活率y′1max=94.5862%;ST制剂压片保护剂:当聚乙烯吡咯烷酮12.0%,可溶性淀粉25.0%,硫代硫酸钠4.5%,麦芽糖2.5%时,活菌存活率y′2max=97.8468%。对优化得到的4组保护剂配方进行验证实验。结果证明优化确定的保护剂配方有效的提高了2个菌株（种）活菌制剂的存活率。对2个菌株（种）的活菌制剂成品分别进行检定,结果如下:外观完整,硬度适宜;重量差异满足药典规定;菌片含水率≤5%;四组保护剂配方对应的菌片活菌数均＞2.5×1010/g。对四组保护剂配方所对应的菌片分别进行了加速实验,三个月后四组保护剂配方对应的菌片活菌存活率均≥10%,相当于在室温下储藏1年。