论文摘要
实验第一部分MMP-3、MMP-9基因SNPs与冠心病易感性的关联分析背景:MMPs是一组可降解细胞外基质中分子成份的内肽酶家族,它们在动脉粥样硬化斑块进展及破裂中的重要作用已逐渐被认识。越来越多的证据显示MMPs启动子区域一系列SNPs标记,可改变MMPs的转录活性,从而影响冠心病的易感性。而MMPs外显子区域的非同义多态性位点与冠心病的患病风险间的关系目前研究较少。目的:本研究旨在分析MMP-3基因的-1612 5A/6A、-376C/G启动子区域SNP位点和Glu45 Lys外显子区域的非同义多态性位点以及MMP-9基因的-1562C/T启动子区域SNP位点和R279Q外显子区域的非同义多态性位点与中国汉族人群冠心病易感性间有无相关性。方法:本研究入选了1373例经冠状动脉造影证实的冠心病病人及695例健康对照人群。该研究对MMP-3基因的3个SNP位点及MMP-9基因的2个SNP位点,采用PCR-RFLP的方法进行了基因分型。结果:MMP-3基因编码区Glu45 Lys非同义多态位点与冠心病显著相关。病例组和对照组45 Lys（A）等位基因频率分别为0.41和0.37,OR值为1.21（95%CI 1.06-1.38;p值0.005）;即携带有45 Lys（A）等位基因者发生冠心病的风险较非携带45 Lys（A）者升高21%。结果还发现MMP-9基因编码区R279Q非同义多态位点与冠心病亦显著相关。病例组和对照组279Q等位基因频率分别为0.35和0.31,OR值为0.87（95%CI 0.76-1.00;p值0.049）;即携带279Q等位基因者发生冠心病的危险较非携带279Q等位基因者降低13%。本研究还发现MMP-3基因启动子区域-1612 5A/6A及-376C/G多态性与冠心病的患病风险之间无显著相关性:病例组和对照组-1612 5A等位基因频率分别为0.17和0.19（OR值0.88,95%C10.74-1.04,p值0.130）;病例组和对照组-376G等位基因频率分别为0.33和0.31（OR值1.07,95%CI0.93-1.23,p值0.321）;MMP-9基因启动子区域-1562C/T多态性与冠心病的患病风险之间亦无显著相关性:病例组和对照组-1562T等位基因频率分别为0.11和0.10（OR值1.03,95%CI0.83-1.27,p值0.783）。经调整年龄、性别、BMI、高血压、糖尿病等传统危险因素后,单体型分析结果显示MMP-3 6A-C-Lys（-1612 6A,-376C,45 Lys）单体型在冠心病病例组中的频率明显高于对照组（8.9%:5.1%）,OR值1.68,95%CI 1.39—1.974,p=0.0006。而且6A-G-Lys（-16126A,-376G,45 Lys）单体型在冠心病病例组的频率亦高于对照组（16.4%:13.4%）,OR值1.35,95%CI 1.14—1.56,p=0.006。因此6A-C-Lys单体型者发生冠心病的风险较非6A-C-Lys者升高68%;而6A-G-Lys单体型者发生冠心病的风险较非6A-G-Lys者升高35%。经调整年龄、性别、BMI、高血压、糖尿病及血脂水平等传统危险因素后,单体型分析结果显示MMP-9 C-Q及T-R单体型在冠心病病例组及对照组中频率均无显著性差异。结论:MMP-3常见基因多态性与中国汉族人群冠心病的易感性具有相关性。实验第二部分MMP-3、MMP-9基因SNPs与冠状动脉粥样硬化程度的关联分析目的:MMP-3、MMP-9在动脉粥样硬化斑块的进展及破裂中发挥重要的作用。该研究探讨MMP-3、MMP-9基因SNPs与冠心病患者冠状动脉粥样硬化程度间的相关性。方法:入选经冠状动脉造影证实的汉族冠心病病人1371例,如患者前降支、回旋支及右冠状动脉中仅一支冠状动脉直径狭窄≥50%定义为单支病变者,共332例;如患者上述三支冠状动脉中有两支直径狭窄≥50%定义为双支病变者,共445例;如上述三支冠状动脉直径狭窄均≥50%,则定义为三支病变者,共594例。选择MMP-3-1612 5A/6A、-376C/G及Glu45Lys等SNPs位点以及MMP-9-1562C/T、R279Q等SNPs位点,采用聚合酶链式反应—限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）方法确定基因型。χ2检验用于单因素分析时检验SNP位点与冠状动脉粥样硬化程度间的关联。Logsitic回归模型分析用以校正混杂因素。结果:（1）MMP-3-1612 5A/6A多态性位点在冠心病患者单支病变、双支病变、三支病变组中5A等位基因频率分别是0.185,0.183,0.152;-376C/G多态性位点在以上三组中-376G等位基因频率分别是0.329,0.326,0.325;Glu45 Lys多态性位点在以上三组中45 Lys等位基因频率分别是0.423,0.417,0.405。（2）-16125A/6A多态性位点5A等位基因频率在三支病变组中明显低于单支病变组（OR 0.74,P=0.04）;相对于6A6A基因型,含有5A等位基因的纯合子及杂合子频率在三支病变组明显低于单支病变组（OR 0.74,P=0.04）。（3）MMP-9-1562C/T多态性位点在冠心病患者单支病变、双支病变、三支病变组中-1562T等位基因频率分別是0.113,0.058,0.099;R279Q多态性位点在冠心病患者单支病变、双支病变、三支病变组中279Q等位基因频率分别是0.313,0.321,0.302。应用Logistic回归模型分析,上述多态性位点等位基因频率及基因型频率在不同冠状动脉病变支数组中亦无显著性差异,P＞0.05。结论:中国汉族冠心病患者中MMP-3基因-1612 5A/6A多态性位点可能与冠心病患者冠状动脉粥样硬化程度相关,5A等位基因可能对冠状动脉粥样硬化的进展有保护作用。而MMP-9-1562C/T及R279Q多态性位点与冠状动脉病变支数无关,因而可能与冠状动脉粥样硬化病变程度无关。