论文摘要
目的：翼状胬肉是以组织重构、细胞增殖、血管生成和炎症反应为特征的眼表常见病。接受日光照射较多的人群发病率较高，这表明了紫外线辐射在该病的发病机制中起重要作用。目前对于翼状胬肉的发病机制尚没有一种公认的学说。近年来，国内外的研究热点多集中在基质金属蛋白酶对细胞外基质的影响，但对于紫外线辐射与基质金属蛋白酶异常表达的关联性尚未受到足够的重视。本实验的目的在于检测翼状胬肉组织中MMP-1和TIMP-1的表达水平，并评价不同剂量的中波紫外线辐射对培养的人正常结膜上皮细胞中MMP-1及TIMP-1表达的影响，以探讨中波紫外线辐射对结膜上皮细胞中MMP-1表达的诱导作用，以期为预防及治疗翼状胬肉提供理论依据。方法：1．运用免疫组化和RT-PCR技术检测人翼状胬肉与正常结膜组织中MMP-1和TIMP-1的蛋白质及mRNA的表达。2．培养了成人正常结膜及翼状胬肉上皮细胞，并对培养的正常结膜上皮细胞施以0～80mJ／cm2的UVB辐射，运用免疫组化和RT-PCR技术检测各组结膜上皮细胞及翼状胬肉上皮细胞中MMP-1及TIMP-1的蛋白质和mRNA的表达水平。结果：1．MMP-1的蛋白质在翼状胬肉的上皮层强烈表达，在正常结膜组织中未见阳性表达，二者之间的差异具有统计学意义。TIMP-1蛋白质在二者中的表达无明显差异。相对应的，MMP-1 mRNA在翼状胬肉组织中表达，正常结膜组织中亦未见MMP-1 mRNA的扩增条带，TIMP-1 mRNA在二者中均有表达。2．本实验采用改良的组织块法成功地进行了成人的正常结膜上皮细胞及成人翼状胬肉上皮细胞的原代和传代培养，并经角蛋白染色鉴定证实为上皮细胞。3．不同剂量的UVB照射后结膜上皮细胞中MMP-1的表达水平与UVB辐射存在剂量依赖关系。未照射组和10 mJ／cm2组未见MMP-1蛋白质和mRNA的阳性表达：20 mJ／cm2组的结膜上皮细胞中开始出现MMP-1的阳性表达，从20～60 mJ／cm2组其表达水平依次升高；60 mJ／cm2组与前两组相比，其差异具有统计学意义：60 mJ／cm2组MMP-1的表达水平比翼状胬肉上皮细胞组低，且差异具统计学意义；80 mJ／cm2组的细胞经照射后出现“拉网”现象，在继续培养的过程中逐渐脱壁、死亡。而TIMP-1的蛋白质和mRNA在各组正常结膜上皮细胞和翼状胬肉上皮细胞中均有阳性表达，差异无统计学意义。结论：1．翼状胬肉组织中MMP-1蛋白质和mRNA高表达，其特异的组织抑制因子TIMP-1蛋白质和mRNA的表达水平未随之相应升高。2．UVB辐射诱导了正常结膜上皮细胞中MMP-1蛋白质和mRNA的表达，且MMP-1的表达水平与UVB辐射存在明显的剂量依赖关系。TIMP-1的表达不受UVB辐射的影响。3．采用改良的组织块培养法进行成人的正常结膜上皮细胞及翼状胬肉上皮细胞的原代和传代培养，此方法简捷、价廉、实用，适宜推广。
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