论文摘要
目的：本研究以骨髓基质细胞为种子细胞,制备聚乳酸乙酸交酯／β-磷酸三钙（PLGA/β-TCP）多孔复合材料,并以其为支架,评价BMSCs/PLGA/β-TCP修复下颌骨缺损的潜能,为将来运用于临床下颌骨缺损修复提供新的途径。方法：1、PLGA按L-LA：GA=70：30（摩尔比）聚合,红外光谱、磁谱共振氢谱分析后复合β-TCP （PLGA:β-TCP=6:4,质量比）,以NaCl为致孔剂的溶液浇铸/粒子沥滤技术制备PLGA/β-TCP多孔复合支架,比重法测定孔隙率,电镜下观察支架材料表面和孔隙内BMSCs附着情况。2、犬股骨骨髓穿刺,用密度梯度离心法分离、获取BMSCs,体外培养增殖,成骨诱导剂诱导分化后,进行成骨细胞表型鉴定。取成年比格犬6只,随机分成实验组和对照组,各3只。以成骨诱导后的BMSCs为种子细胞,PLGA/β-TCP为支架,建立犬单侧下颌骨3cm节段缺损模型,实验组植入BMSCs/PLGA/β-TCP复合体：对照组植入PLGA/β-TCP在术后4周、12周、24周处死动物,分别进行影像学、大体标本、组织学观察骨缺损区修复效果。结果：1、PLGA/β-TCP多孔复合支架的孔隙率约为85%,孔径在150μm～300μm之间；SEM显示BMSCs可在该支架内生长繁殖。2、用密度梯度梯度离心法结合贴壁法成功分离并获得BMSCs,体外培养并成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色、BGP细胞免疫化学和免疫荧光均阳性。3、犬下颌骨节段缺损模型：①术后4周,CT扫描实验组有新生骨组织形成,对照组无成骨影像；组织学观察实验组见支架材料均有不同程度的降解,可见大量成骨细胞、破骨细胞及软骨细胞,对照组见异物巨细胞和炎性细胞浸润；OPN免疫组化实验组阳性表达,对照组无表达。②术后12周,CT扫描实验组充满密质骨影像,对照组密度较4周时减低；HE染色,实验组见骨岛形成、周围成骨细胞增生活跃、支架材料进一步降解,对照组有大量纤维结缔组织形成、支架降解不如实验组明显；OPN免疫组化实验组更多细胞阳性表达,对照组无表达；③术后24周,CT扫描实验组缺损区中央有松质骨形成、周围骨皮质包绕,对照组为软组织影像；HE染色,实验组形成较成熟骨组织、骨髓腔隙,支架材料完全降解,对照组缺损部分呈纤维性愈合。结论：1、 PLGA/β-TCP多孔复合支架是一种良好的骨组织工程支架材料。2、 BMSCs可以作为骨组织工程的种子细胞。3、经成骨诱导的BMSCs复合PLGA/β-TCP支架的组织工程化骨能修复犬下颌骨节段缺损。
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