本文主要研究内容
作者肖彤洋（2019）在《结核分枝杆菌与母牛分枝杆菌交叉免疫及20种结核蛋白抗原性研究》一文中研究指出：结核病仍然是严重威胁全世界人民生命健康的疾病之一,耐多药结核的日益增多,结核分枝杆菌与HIV共感染人数的持续增加以及庞大的潜伏感染人群等因素增加了结核病防控工作的难度。疫苗是从根源上控制传染病最有效的措施,BCG是目前唯一被批准临床使用的抗结核疫苗,但是其抗结核感染的保护效果欠佳,因此人们正致力于研发新的疫苗取代或增强BCG,目前新疫苗的研发包括治疗性疫苗和预防性疫苗。治疗性疫苗旨在抑制潜伏感染患者的再燃和缩短活动性结核病人的治疗周期,采用母牛分枝杆菌全菌蛋白提取物研制的一种治疗性疫苗目前己经进入临床三期研究,但是关于母牛分枝杆菌全菌蛋白提取物发挥特异性免疫治疗的作用机制还未知,而基因组学和免疫蛋白质组学的发展为深入研究免疫机制提供了技术支撑。因此本研究的第一部分,通过研究母牛分枝杆菌与结核分枝杆菌和卡介苗的交叉免疫反应,探讨母牛分枝杆菌全菌蛋白提取物免疫防治结核分枝杆菌感染的机制。首先对母牛分枝杆菌(ATCC 95051)全基因组进行了测序分析,共注释了5941个编码基因,再使用BLAST对3株人型结核分枝杆菌和16株牛型结核分枝杆菌进行了比较基因组学分析,共鉴定到2164个母牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的同源基因,这些基因分布在不同功能类别中。进一步固体培养法培养母牛分枝杆菌(ATCC 95051)、结核分枝杆菌(H37Rv)和卡介苗(BCG,中国株),收集菌体后,采用超声破碎菌体制备全菌蛋白抗原,对BALB/c小鼠进行免疫,检测交叉免疫反应水平。体液免疫采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体IgG水平;细胞免疫采用细胞因子释放试验(CRA)检测各类细胞因子水平。3种分枝杆菌抗原免疫的小鼠均能产生较高水平的抗体IgG和细胞因子IFN--y和IL-2,而产生较低水平的IL-4。交叉免疫试验结果显示,母中分枝杆菌、H37Rv和BCG分别同免疫后小鼠进行交叉免疫检测,均能产生高水平的IFN-γ和IL-2及高滴度IgG抗体。使用结核分枝杆菌蛋白质组芯片与母牛分枝杆菌免疫小鼠的血清交叉反应,检测与IgG或IgM反应的阳性蛋白,进一步使用STRING软件分析蛋白质间的相互作用,结果共检测到424个与IgG反应的阳性蛋白及212个与IgM反应的阳性蛋白,其中72个蛋白同时与IgG和IgM反应,蛋白质相互作用分析发现这些阳性蛋白以单独或相互作用的形式发挥相关交叉免疫作用。预防性疫苗则针对的是未感染结核分枝杆菌的健康人,研发预防性疫苗的一个重点突破口就是寻找更多的优势保护抗原。本实验室前期通过反向疫苗学筛选出了若干结核优势抗原,这些抗原不仅可用于疫苗的构建,还可用于免疫学诊断方法的建立。基于抗原抗体反应的血清学诊断是一种快速、简便、价廉的免疫学诊断方法,相较于只能对菌阳肺结核进行诊断的病原学检测方法,还具有能对菌阴肺结核进行诊断的优势。目前结核病血清学诊断的瓶颈是缺乏特异性的诊断用抗原,因此,本研究的第二部分旨在找到新的抗原或抗原组合用于血清学诊断,同时也为疫苗用抗原的筛选提供参考。首先克隆、表达和纯化了 20个结核分枝杆菌蛋白,然后通过ELISA实验检测其在258份人血清及4种动物血清中的反应情况,进一步通过Perl软件筛选灵敏度和特异度最优的血清学诊断抗原组合。单个蛋白分析结果显示,效果最好的是Rv0432和Rv0934,其灵敏度和特异度分别为87.90%/68.79%和66.34%/84.16%;蛋白抗原组合分析结果显示,效果最好的组合是Rv1886c-Rv0934和Rv1886c-Rv2318-Rv0934,灵敏度平和特异度分别为80.25%/73.27%和81.53%/70.30%。而与动物免疫血清的反应结果显示有12个蛋白抗原能特异性地与结核分枝杆菌免疫的小鼠血清反应,而不存在与母牛分枝杆菌或BCG的交叉免疫反应。抗原的评价包括抗原性和免疫原性的评价,承上本研究的第三部分,进一步对Rv0674蛋白进行免疫原性评价。首先用Rv0674免疫BALB/c小鼠,然后采用ELISA检测体液免疫,用CRA检测细胞免疫,阳性对照选用了Ag85B。结果显示Rv0674可以诱导高水平的IFN-γ和IL-2以及高滴度的IgG,表明Rv0674能引起较强的体液和细胞免疫应答。此外,细胞因子谱和IgG亚型谱分析显示Rv0674诱导以Thl细胞因子为主的Th1/Th2混合型保护性免疫反应。综上所述,母牛分枝杆菌与结核分枝杆菌之间存在较多的同源免疫蛋白抗原,能引起较强的交叉免疫反应,为用母牛分枝杆菌研制新的抗结核疫苗提供基础科学依据;蛋白组合Rv1886c-Rv0934和Rv1886c-Rv2318-Rv0934可作为潜在的新血清学诊断标志物;Rv0674可作为新的候选保护性抗原用于抗结核疫苗的构建。
Abstract
jie he bing reng ran shi yan chong wei xie quan shi jie ren min sheng ming jian kang de ji bing zhi yi ,nai duo yao jie he de ri yi zeng duo ,jie he fen zhi gan jun yu HIVgong gan ran ren shu de chi xu zeng jia yi ji pang da de qian fu gan ran ren qun deng yin su zeng jia le jie he bing fang kong gong zuo de nan du 。yi miao shi cong gen yuan shang kong zhi chuan ran bing zui you xiao de cuo shi ,BCGshi mu qian wei yi bei pi zhun lin chuang shi yong de kang jie he yi miao ,dan shi ji kang jie he gan ran de bao hu xiao guo qian jia ,yin ci ren men zheng zhi li yu yan fa xin de yi miao qu dai huo zeng jiang BCG,mu qian xin yi miao de yan fa bao gua zhi liao xing yi miao he yu fang xing yi miao 。zhi liao xing yi miao zhi zai yi zhi qian fu gan ran huan zhe de zai ran he su duan huo dong xing jie he bing ren de zhi liao zhou ji ,cai yong mu niu fen zhi gan jun quan jun dan bai di qu wu yan zhi de yi chong zhi liao xing yi miao mu qian ji jing jin ru lin chuang san ji yan jiu ,dan shi guan yu mu niu fen zhi gan jun quan jun dan bai di qu wu fa hui te yi xing mian yi zhi liao de zuo yong ji zhi hai wei zhi ,er ji yin zu xue he mian yi dan bai zhi zu xue de fa zhan wei shen ru yan jiu mian yi ji zhi di gong le ji shu zhi cheng 。yin ci ben yan jiu de di yi bu fen ,tong guo yan jiu mu niu fen zhi gan jun yu jie he fen zhi gan jun he ka jie miao de jiao cha mian yi fan ying ,tan tao mu niu fen zhi gan jun quan jun dan bai di qu wu mian yi fang zhi jie he fen zhi gan jun gan ran de ji zhi 。shou xian dui mu niu fen zhi gan jun (ATCC 95051)quan ji yin zu jin hang le ce xu fen xi ,gong zhu shi le 5941ge bian ma ji yin ,zai shi yong BLASTdui 3zhu ren xing jie he fen zhi gan jun he 16zhu niu xing jie he fen zhi gan jun jin hang le bi jiao ji yin zu xue fen xi ,gong jian ding dao 2164ge mu niu fen zhi gan jun yu jie he fen zhi gan jun de tong yuan ji yin ,zhe xie ji yin fen bu zai bu tong gong neng lei bie zhong 。jin yi bu gu ti pei yang fa pei yang mu niu fen zhi gan jun (ATCC 95051)、jie he fen zhi gan jun (H37Rv)he ka jie miao (BCG,zhong guo zhu ),shou ji jun ti hou ,cai yong chao sheng po sui jun ti zhi bei quan jun dan bai kang yuan ,dui BALB/cxiao shu jin hang mian yi ,jian ce jiao cha mian yi fan ying shui ping 。ti ye mian yi cai yong jian jie mei lian mian yi xi fu shi yan (ELISA)jian ce xie qing kang ti IgGshui ping ;xi bao mian yi cai yong xi bao yin zi shi fang shi yan (CRA)jian ce ge lei xi bao yin zi shui ping 。3chong fen zhi gan jun kang yuan mian yi de xiao shu jun neng chan sheng jiao gao shui ping de kang ti IgGhe xi bao yin zi IFN--yhe IL-2,er chan sheng jiao di shui ping de IL-4。jiao cha mian yi shi yan jie guo xian shi ,mu zhong fen zhi gan jun 、H37Rvhe BCGfen bie tong mian yi hou xiao shu jin hang jiao cha mian yi jian ce ,jun neng chan sheng gao shui ping de IFN-γhe IL-2ji gao di du IgGkang ti 。shi yong jie he fen zhi gan jun dan bai zhi zu xin pian yu mu niu fen zhi gan jun mian yi xiao shu de xie qing jiao cha fan ying ,jian ce yu IgGhuo IgMfan ying de yang xing dan bai ,jin yi bu shi yong STRINGruan jian fen xi dan bai zhi jian de xiang hu zuo yong ,jie guo gong jian ce dao 424ge yu IgGfan ying de yang xing dan bai ji 212ge yu IgMfan ying de yang xing dan bai ,ji zhong 72ge dan bai tong shi yu IgGhe IgMfan ying ,dan bai zhi xiang hu zuo yong fen xi fa xian zhe xie yang xing dan bai yi chan du huo xiang hu zuo yong de xing shi fa hui xiang guan jiao cha mian yi zuo yong 。yu fang xing yi miao ze zhen dui de shi wei gan ran jie he fen zhi gan jun de jian kang ren ,yan fa yu fang xing yi miao de yi ge chong dian tu po kou jiu shi xun zhao geng duo de you shi bao hu kang yuan 。ben shi yan shi qian ji tong guo fan xiang yi miao xue shai shua chu le re gan jie he you shi kang yuan ,zhe xie kang yuan bu jin ke yong yu yi miao de gou jian ,hai ke yong yu mian yi xue zhen duan fang fa de jian li 。ji yu kang yuan kang ti fan ying de xie qing xue zhen duan shi yi chong kuai su 、jian bian 、jia lian de mian yi xue zhen duan fang fa ,xiang jiao yu zhi neng dui jun yang fei jie he jin hang zhen duan de bing yuan xue jian ce fang fa ,hai ju you neng dui jun yin fei jie he jin hang zhen duan de you shi 。mu qian jie he bing xie qing xue zhen duan de ping geng shi que fa te yi xing de zhen duan yong kang yuan ,yin ci ,ben yan jiu de di er bu fen zhi zai zhao dao xin de kang yuan huo kang yuan zu ge yong yu xie qing xue zhen duan ,tong shi ye wei yi miao yong kang yuan de shai shua di gong can kao 。shou xian ke long 、biao da he chun hua le 20ge jie he fen zhi gan jun dan bai ,ran hou tong guo ELISAshi yan jian ce ji zai 258fen ren xie qing ji 4chong dong wu xie qing zhong de fan ying qing kuang ,jin yi bu tong guo Perlruan jian shai shua ling min du he te yi du zui you de xie qing xue zhen duan kang yuan zu ge 。chan ge dan bai fen xi jie guo xian shi ,xiao guo zui hao de shi Rv0432he Rv0934,ji ling min du he te yi du fen bie wei 87.90%/68.79%he 66.34%/84.16%;dan bai kang yuan zu ge fen xi jie guo xian shi ,xiao 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论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国疾病预防控制中心的肖彤洋，发表于刊物中国疾病预防控制中心2019-09-19论文，是一篇关于母牛分枝杆菌论文,结核分枝杆菌论文,交叉免疫论文,疫苗论文,血清学诊断论文,中国疾病预防控制中心2019-09-19论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国疾病预防控制中心2019-09-19论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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