Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应标准品的制备及应用研究

论文摘要

【目的】制备用于Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）的标准品。【方法】提取胚胎上颌突组织总RNA,行逆转录反应获得第一链的cDNA,再通过PCR回收获得预期Satb2基因片段;通过T-A克隆将该片段插入pGMT质粒载体;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制做和实时荧光定量PCR。【结果】重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pGMT-Satb2基因已成功克隆。【结论】所构建的pGMT-Satb2基因荧光定量PCR检测标准品应用TagMan荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为荧光定量PCR检测Satb2基因的标准方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 技术路线
• 第3章 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.1.1 主要实验设备
• 3.1.2 实验动物
• 3.1.3 主要试剂
• 3.1.4 常用实验试剂的配制
• 3.2 方法
• 3.2.1 组织中 RNA 的提取
• 3.2.2 RNA 浓度检测及定量
• 3.2.3 第一链cDNA 的合成
• 3.2.4 引物设计与合成
• 3.2.5 Satb2 质粒标准品的构建
• 3.2.6 制作标准曲线
• 第4章 结果
• 4.1 RNA 质量鉴定
• 4.2 PCR 结果
• 4.3 酶切结果
• 4.4 测序结果
• 4.5 标准曲线
• 第5章 讨论
• 5.1 Satb2 基因
• 5.2 引物设计
• 5.2.1 引物的特异性
• 5.2.2 长度
• 5.2.3 G+C 含量
• 5.2.4 引物3'端的末位碱基
• 5.2.5 模板内与引物相似性较高序列
• 5.2.6 Tm 值
• 5.2.7 发夹结构
• 5.2.8 二聚体
• 5.3 RNA 抽提
• 5.3.1 减少 RNA 酶污染
• 5.3.2 减少杂质污染
• 5.3.3 RNA 质量的检测
• 5.4 质粒构建
• 5.4.1 关于质粒
• 5.4.2 质粒抽提
• 5.4.3 质粒的鉴定
• 5.5 实时定量 PCR 标准品的制备
• 第6章 结论
• 第7章 参考文献
• 致谢
• 发表论文情况
• 论著：Satb2 基因实时荧光定量聚合酶链反应标准品的制备及应用研究
• 个人简历