pGRIM-19真核表达载体的构建以及对人前列腺癌细胞PC-3M凋亡机制的研究

论文摘要

目的:通过重组pGRIM-19质粒在前列腺癌细胞PC-3M中的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖,进而促进其凋亡。方法:（1）免疫组织化学方法检测人前列腺癌组织中的GRIM-19的表达;（2）pGRIM-19真核表达载体的构建;（3）细胞培养及重组质粒转染PC-3M细胞;（4）细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;（5）流式细胞术检测细胞周期;（6）RT-PCR检测转染细胞中GRIM-19 mRNA表达情况;（7）Western blot检测转染细胞中GRIM-19及相关凋亡因子的蛋白表达情况。结果:（1）免疫组化显示:正常和增生的前列腺癌组织中GRIM19的表达量明显高于癌组织;（2）成功构建pGRIM-19重组质粒,鉴定结果与预期结果完全一致;（3）RT-PCR检测:GRIM-19成功转染至PC-3M细胞中,转染组GRIM-19mRNA的含量明显高于对照组;（4）Western blot结果显示,转染pGRIM-19质粒的细胞内GRIM-19蛋白表达量明显增高;（5）MTT实验显示:重组质粒转染PC-3M细胞后,肿瘤细胞生长与对照组相比明显受到抑制;（6）流式细胞术检测发现pGRIM-19质粒促进了PC-3M细胞凋亡;（7）吖叮橙染色检测发现pGRIM-19质粒促进了PC-3M细胞凋亡;（8）Western blot结果显示相关的凋亡因子的表达量明显降低。结论:GRIM-19的高表达可抑制人前列腺癌PC-3M细胞生长,诱导前列腺癌细胞凋亡,为前列腺癌的治疗提供了新思路。

论文目录

• 提要
• 1 绪论
• 1.1 GRIM-19 的发现
• 1.2 GRIM-19 的抗癌机制
• 1.3 GRIM-19 的分子机制研究
• 1.4 GRIM-19 表达的临床意义
• 2 材料与方法
• 2.1 主要仪器与设备
• 2.2 主要试剂与药品
• 2.3 实验细胞及菌株
• 2.4 免疫组织化学方法鉴定GRIM-19 在前列腺癌组织中的表达
• 2.5 GRIM-19 真核表达载体的构建
• 2.6 细胞培养与真核细胞转染
• 2.7 细胞增殖抑制实验——MTT 法
• 2.8 细胞凋亡检测
• 2.9 RT-PCR 检测MRNA 的表达
• 2.10 WESTERN BLOT 检测蛋白表达
• 2.11 数据统计
• 3 结果
• 3.1 免疫组织化学方法鉴定GRIM-19 在前列腺癌组织中的表达
• 3.2 成功构建 pGRIM-19 真核表达载体
• 3.3 成功转染并抑制PC-3M 细胞生长，诱导其凋亡
• 3.4 pGRIM-19 质粒转染后 PC-3M 细胞凋亡相关基因蛋白表达分析
• 4 讨论
• 4.1 GRIM-19 在前列腺癌组织中的表达
• 4.2 GRIM-19 抑制PC-3M 细胞的增殖
• 4.3 GRIM-19 诱导前列腺癌细胞凋亡
• 4.4 细胞凋亡与细胞凋亡机制的探讨
• 结论
• 参考文献
• 英文缩写词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢