论文摘要
黄酮类的植物多酚生物活性广泛,一直受到医药界的高度关注。我们对槲皮素进行了甲基化改造,将其五个羟基全部甲氧化,获得高纯度低价位的五甲基槲皮素（PMQ）,即3,5,7,3′,4′-pentamethylquercetin。多甲氧基黄酮类相对于多羟基黄酮类,化学性质更稳定,有利于加工、运输、存储等,且生物利用度提高,胃肠吸收增加、首过消除减少、血浆浓度水平较高、维持时间较长。其生物活性更强:包括抗心血管病、调节血脂、抗炎、抗肿瘤、逆转多药耐药性等。代谢综合征（metabolic syndrome）是一组心脑血管病的高危因素,其主要表现为腹型肥胖、胰岛素抵抗、血压升高、血脂水平异常。代谢综合征大鼠在脂肪细胞核受体过氧化物酶体增殖物活化受体-γ（PPAR-γ）、细胞因子表达等方面都存在不同程度的紊乱。肥胖是造成胰岛素抵抗,心血管疾病,血糖升高,血脂异常的重要危险因素。在肥胖病人体内,脂肪细胞具有肥大、胰岛素敏感性低以及较高的分泌脂质的特点,导致了血脂升高以及脂肪在肝脏肌肉组织中的异位沉积。PPAR-γ是脂类代谢和能量平衡的重要调节因素,在胰岛素抵抗和肥胖过程中起着重要的作用。PPAR-γ活化之后能够引起脂肪细胞的分化、脂肪酶生成和血糖调节子的生成。脂联素（adiponectin）是脂肪细胞分泌的一种激素蛋白,是机体内重要的“抗病”脂肪细胞因子,生物活性广泛,近来也倍受关注。本实验以3T3-L1前脂肪细胞为研究模型,探讨不同浓度的五甲基槲皮素对3T3-L1前脂肪细胞PPAR-γ和脂联素mRNA表达的影响,以及对脂肪细胞增值,分化的影响,为深入研究五甲基槲皮素的对3T3-L1脂肪细胞药理作用提供实验依据。第一部分五甲基槲皮素对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γ和脂联素mRNA表达的影响目的:比较PMQ和罗格列酮对3T3-L1前脂肪细胞PPARγ及脂联素（adiponectin）mRNA表达的影响。方法:待细胞融合2天后,使用含胰岛素、IBMX、DEX以及血清的培养基诱导3T3-L1前脂肪细胞分化。诱导分化的第四天给予0.1,0.3,1,3,10,30μmol·L-1的五甲基槲皮素,以及1,10μmol·L-1阳性药物罗格列酮。给药第二天后提取总RNA,以RT-PCR法检测细胞PPAR-γmRNA的表达量。结果:1.与空白组相比,10μmol·L-1阳性药物罗格列酮明显上调脂肪细胞PPAR-γmRNA表达（P<0.05）;PMQ在0.3～3μmol·L-1浓度范围内,明显引起脂肪细胞PPAR-γ在mRNA水平上表达增加（P<0.05）;PMQ的促表达作用强度比罗格列酮强约30倍。2. PMQ在0.11μmol/L-1对adiponectin在mRNA水平上的表达有促进作用,呈浓度依赖关系,浓度越大作用越强。结论: PMQ增加脂肪细胞PPAR-γ以及脂联素mRNA表达,作用强度比罗格列酮至少高1个数量级。第二部分五甲基槲皮素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响目的:研究PMQ对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。方法:常规培养3T3-L1前脂肪细胞,分别加入0.1,0.3,1,3,10,30,100,300μmol·L-1的五甲基槲皮素,作用24,48,72小时后,以噻唑蓝比色实验（MTT法）检测细胞的增值情况。结果:与溶剂组相比,药物作用24小时,各浓度组PMQ对3T3-L1前脂肪细胞增殖无明显作用;药物作用48小时,100μmol·L-1显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖;药物作用72小时,10～100μmol·L-1浓度范围内的PMQ可明显抑制3T3-L1的增殖（P<0.05）。结论:随着PMQ与细胞共培养的时间的延长（从24小时～72小时）,有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖的药物浓度降低,提示作用时间对药物效应有明显影响。第三部分五甲基槲皮素对3T3-L1脂肪细胞分化的影响目的:比较PMQ和罗格列酮对3T3-L1前脂肪细胞分化。方法:待细胞融合2天后,使用含胰岛素、IBMX、DEX以及血清的培养基诱导3T3-L1前脂肪细胞分化。分化第四天给予0.1,0.3,1,3,10,30,100μmol·L-1的五甲基槲皮素和1,10μmol·L-1阳性药物罗格列酮。给药后24小时,油红O染色镜下观察。异丙醇洗脱后,570nm波长测值,定量分析细胞的分化情况。结果:10μmol·L-1阳性药物罗格列酮可明显促进脂肪细胞的分化（P<0.05）;PMQ在0.1～30μmol·L-1浓度范围内,对于脂肪细胞的分化无明显作用（P<0.05）。结论:在讨论的浓度范围内的PMQ对3T3-L1前脂肪细胞分化没有显著的作用。
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