论文摘要
前言肺癌是我国大中城市中恶性肿瘤的第一位死因,其发病率和死亡率增长迅速。尽管吸烟是肺癌发生的首要原因,但其不足以解释非吸烟肺癌患者的流行病学特征。特别是女性肺癌患者多以非吸烟者为主,肺腺癌为主要病理类型。肺癌的形成是一个多因素、多阶段的过程,是环境危险因素和个体遗传因素复杂交互作用的结果。DNA修复基因单核苷酸多态可以改变机体蛋白质功能以及个体修复损伤DNA的能力,而DNA修复能力的缺陷会导致个体遗传的不稳定性乃至癌症的发生。X射线修复交叉互补基因（X-ray repair cross complementing group1.XRCC1）是一个重要的DNA损伤修复基因,它在碱基切除修复和单链断裂修复机制中都发挥了关键性的作用。XRCC1基因单核苷酸多态很可能改变其编码蛋白的功能和修复能力,从而导致遗传的不稳定性和癌症的发生。目的本研究旨在应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术检测并分析了非吸烟女性人群中XRCC1 Arg194Trp,Arg280His,Arg399Gln和XRCC1 T-77C多态性改变及其单体型与非吸烟女性肺癌易感性关系以及与环境暴露危险因素的交互作用,为筛检高危人群,进行肺癌一级预防提供理论依据。方法本研究采用病例对照研究方法,包括新发非吸烟女性肺癌350例,取癌旁组织提取基因组DNA。非癌对照350例,按年龄（±5岁）与病例频数匹配,采外周血提取基因组DNA,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术,检测并分析了XRCC1四种多态性（XRCC1 Arg194Trp,Arg280His,Arg399Gln和XRCC1 T-77C）基因型改变;同时通过流行病学调查分析非吸烟女性肺癌可能的环境暴露危险因素;采用非条件logistic回归分析多态基因型与肺癌的相关关系及其与暴露环境危险因素的交互作用;应用SHEsis软件推测多态位点的单体型并分析其与非吸烟女性肺癌易感性的关系。结果一、单因素分析1、环境危险因素及XRCC1突变等位基因在病例组和对照组中的分布无论在工作场所或家庭中,成年期或未成年期均未见到被动吸烟与非吸烟女性肺癌发生有何联系。病例组与对照组间煤烟暴露史,肿瘤家族史也无显著性差异。但病例组患者油烟暴露的比例显著高于对照组（42.3%vs 22.0%,p＜0.05）。油烟暴露引起肺癌的相对危险度OR为2.60（95%CI[1.87-3.61]）。此外,在350名正常对照中,XRCC基因各位点的突变等位基因的频率分别为:XRCC1-77C=0.09;194Trp=0.25;280His=0.11;399Gln=0.25,频率分布符合Handy-Weinberg遗传平衡定律。但XRCC1 T-77C和Arg399Gln等位基因的频率在病例组和对照组中的分布存在统计学意义上的差异（P=0.004和0.003）。2、XRCC1基因各位点多态基因型与非吸烟女性肺癌易感性的关系XRCC1基因Arg194Trp和Arg280His两个位点的多态性与肺癌的患病风险无显著性关联。在调整了年龄和油烟暴露等因素后,携带XRCC1 399Gln/Gln基因型的个体患肺癌的风险是携带纯合野生基因型个体的1.73倍（95%CI[1.01～2.97],P=0.01）。携带XRCC1-77TC的个体与携带-77TT者比较,患肺癌的风险增加了51%（校正OR=1.51,95%CI[1.01～2.97],P=0.04）,而携带-77CC的个体与-77TT者比较,其患肺癌的风险增加约2倍（校正OR=3.14,95%CI[0.96～10.30],p=0.091）,但未达到统计学显著性水平。3、分层分析将肺癌组按病理组织类型进行分层分析,发现腺癌组XRCC1密码子399位点和启动子区域-77位点多态基因型分布与对照组间的差异有统计学意义（P＜0.05）,而且携带XRCC1399Gln和-77C突变等位基因的个体发生肺腺癌的危险性更大。携带杂合突变型Arg/Gln和纯合突变型Gln/Gln基因型的个体患肺腺癌的风险分别是Arg/Arg基因型携带者的1.61倍（95%CI为1.09～2.36,）和2.58倍（95%CI为1.42～4.69）。携带-77TC/CC联合突变基因型的个体患肺腺癌的风险增加到1.81（校正OR=1.81,95CI[1.18～2.79]）。在鳞癌组和其他类型组中,XRCC1基因四个多态位点基因型在病例组与对照组间的分布均无显著性差异。二、多因素logistic回归分析我们首先剔出了在单因素分析中无统计学显著性意义的变量因素,最后进入到回归方程的变量包括XRCC1基因两个多态位点（399密码子和启动子区域-77）和两个非遗传因素（年龄和烹饪油烟暴露）。烹饪油烟暴露是回归模型中最重要的危险因素（癌症组:校正OR=2.51;腺癌组:校正OR=2.75）;在此模型中,遗传因素对非吸烟女性肺癌的发生风险具有相对中等的影响。399位点Gln/Gln基因型携带者（Gln/Gln vs Arg/Arg:OR=1.75,95%CI[1.02～3.01]）和启动子区域-77C突变等位基因（TC+CC vs TT:OR=1.66,95%CI[1.13～2.42]）携带者均可显著增加患肺癌的风险。按肺癌病理组织类型分层分析显示,肺腺癌组的OR值比总肺癌组略有增加,而且399位点Arg/Gln基因型携带者发生肺腺癌的风险也显著增加（校正OR=1.63,95%CI[1.11～2.40。P=0.014]）。三、XRCC1单体型与非吸烟女性肺癌易感性关系通过SHEsis软件进行单体型分析表明,本研究中的四种位点的单核苷酸多态存在着显著的连锁不平衡,D′最小为0.72（所有的P＜0.0001）。根据已知的4个位点基因型可推断出12种单体型,我们将等位基因频率小于0.03的单体型合并,有六种单体型在对照组中占93.9%,在病例组中占86%。对病例组和对照组单体型分布的总体检验发现存在显著性差异（P＜0.0001）。与正常T-Arg-Arg-Arg单体型比较,T-Arg-His-Arg和T-Trp-Arg-Arg单体型可降低患肺癌的风险,但不具有统计学意义（OR=0.67和0.75）;而T-Trp-Arg-Gln单体型可显著提高患肺癌的风险（OR=2.26）。四、烹饪油烟暴露与XRCC1多态基因型交互作用对非吸烟女性肺癌的影响我们进一步利用非条件logistic回归模型分析XRCC1 Arg399Gln或XRCC1T-77C与烹饪油烟暴露对非吸烟女性肺癌患病风险的交互作用。将杂合和纯合突变基因型进行联合分析,在有油烟暴露史的非吸烟女性中,携带399位点或-77位点至少一个突变等位基因的个体发生肺癌的风险增加（OR分别为3.46和4.35）但无统计学显著性意义。结论烹饪油烟暴露是非吸烟女性肺癌的环境危险因素;XRCC1Arg399Gln和T-77C多态可能会改变非吸烟女性肺癌发生的风险。