论文摘要
目的使用DMEM培养基培养乳腺癌细胞系MCF-7细胞,观察PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002对人乳腺癌细胞系MCF-7中雌激素受体ER-a的表达以及ER-a AF-1区磷酸化的影响。探讨PI3K/Akt信号转导通路与ER信号通路之间的关系,初步阐述ER-a(+)乳腺癌患者出现激素治疗抵抗的分子生物学机制,为临床上ER(+)乳腺癌患者激素耐药提供一种合理的治疗方案。方法将MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%小牛血清)中采用单层贴壁传代培养,培养细胞MCF-7用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后,在无酚红DMEM (含5%胎牛血清)中继续培养4天。根据药物作用剂量分组:第一组(实验空白对照组),不加入任何药物。第二组(低剂量LY294002实验组),细胞培养液中药物浓度为5μmol/L。第三组(中剂量LY294002实验组),细胞培养液中药物浓度为10μmol/L。第四组(高剂量LY294002实验组),细胞培养液中药物浓度为20μmol/L。根据药物作用时间分别在0小时、24小时、48小时、72小时收集各组细胞,使用蛋白免疫印迹Western blotting方法检测ER-a及磷酸化ER-a的表达情况,观察药物作用剂量和作用时间对ER-a和ER-a的AF-1区磷酸化的影响。采用SPSS13.0统计软件进行分析,采用SNK-q检验法检验各蛋白表达的差异。结果1.人乳腺癌细胞系MCF-7细胞ER-a的表达情况:经SNK-q检验分析表明,各剂量组MCF-7细胞ER-a在药物作用不同时间后表达无显著性差异(P>0.05)。各时间组MCF-7细胞ER-a在不同剂量药物作用下的表达无显著性差异(P>0.05)。2.人乳腺癌细胞系MCF-7细胞ER-a的AF-1区的磷酸化情况:同一药物剂量在药物作用不同时间后MCF-7细胞ER-a的AF-1区的磷酸化经SNK-q检验分析表明,低剂量实验组MCF-7细胞ER-a的AF-1区在药物作用不同时间后其磷酸化水平无显著性差异(P>0.05),中剂量实验组和高剂量实验组MCF-7细胞ER-a AF-1区在药物作用不同时间后其磷酸化有显著性差异(P<0.05),随着给药时间延长,ER-a AF-1区磷酸化水平下降,在药物作用48小时后ER-a AF-1区磷酸化水平继续下降不明显。在药物作用同一时间段各不同剂量组MCF-7细胞ER-a的AF-1区的磷酸化经SNK-q检验分析表明,在给药后不同的时间点,空白剂量组和低剂量组ER-a的AF-1区磷酸化无显著性差异(P>0.05),中剂量组和高剂量组与空白对照组ER-a的AF-1区磷酸化有显著性差异(P<0.05),且随着药物剂量的增加,ER-a的AF-1区磷酸化水平下降越明显。结论1.PI3K抑制剂LY294002对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞ER-a的表达无明显影响。2.PI3K抑制剂LY294002可以抑制人乳腺癌细胞系MCF-7细胞ER-a的AF-1区磷酸化。3.PI3K抑制剂LY294002对MCF-7细胞ER-a的AF-1区磷酸化的抑制作用呈剂量和时间依赖性,在药物作用48小时时,药物剂量依赖性最强。