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大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡的保护作用及其机理研究

2020-12-29阅读(625)

大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡的保护作用及其机理研究

论文摘要

目的建立过氧化氢（H202）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡模型,研究大蒜素对内皮细胞凋亡的干预作用,并且进一步在分子水平和蛋白水平继续探究其作用机制。方法用不同浓度（0.1lmmol/L、0.5mmol/L与1.0mmol/L）的H202作用HUVEC细胞12h,采用流式细胞术测试细胞的PI阳性率、凋亡率和继发性坏死率,从而建立H202诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型；采用MTT法检测不同浓度大蒜素（1、10、20、40μg/mL）以及不同的作用时间（6、12、24h）对于氧化应激凋亡模型细胞活性的影响；并检测细胞培养液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）的含量；采用RT-PCR法检测基因eNOS, iNOS的表达,Western-blot法测凋亡相关蛋白caspase-3、Bax的表达,从而探究其保护作用与作用机制。结果0.5mmol/L的H202适宜建立氧化应激凋亡模型,因其可以保证一定的凋亡率,但继发性坏死率不明显增加；大蒜素能够减少H202诱导HUVEC的损伤；并且减少细胞培养液中MDA含量,增加SOD含量,增加NO释放量；使基因eNOS的表达显著增加；使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加,Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H202诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用,可能通过增加SOD的含量水平,清除氧自由基、防止脂质过氧化,提高eNOS表达从而增加NO释放量,对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 2O2诱导HUVEC凋亡模型建立'>第一部分 H2O2诱导HUVEC凋亡模型建立
  • 一、材料与方法
  • （一） 实验材料
  • 1. 实验主要器材
  • 2. 实验药物
  • 3. 实验试剂
  • 4. 实验细胞
  • （二） 实验方法与步骤
  • 1. 人脐静脉内皮细胞培养
  • 2. 诱导凋亡实验
  • （三） 数据分析
  • 二、结果
  • 2O2作用效果'>（一） 倒置显微镜观察H2O2作用效果
  • （二） PI阳性率、凋亡率和继发性死亡率检测
  • 1. PI阳性率
  • 2. 细胞凋亡率和继发性死亡率
  • 2O2各浓度组HUVEC细胞凋亡率与继发性死亡率对比'>3. H2O2各浓度组HUVEC细胞凋亡率与继发性死亡率对比
  • 三、讨论与分析
  • 2O2对HUVEC细胞的影响'>（一） H2O2对HUVEC细胞的影响
  • 2O2诱导HUVEC细胞凋亡模型最佳浓度选择'>（二） H2O2诱导HUVEC细胞凋亡模型最佳浓度选择
  • 四、小结
  • 2O2诱导HUVEC凋亡的影响及其作用机制'>第二部分 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡的影响及其作用机制
  • 一、材料与方法
  • （一） 实验材料
  • 1. 实验主要器材
  • 2. 实验药物
  • 3. 实验试剂
  • 4. 实验细胞
  • （二） 实验方法与步骤
  • 1. 人脐静脉内皮细胞培养
  • 2O2诱导HUVEC损伤的影响'>2. MTT检测大蒜素对H2O2诱导HUVEC损伤的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡蛋白水平的影响'>3. Western-blot检测大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡蛋白水平的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡培养液中MDA水平的影响'>4. 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡培养液中MDA水平的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡培养液中SOD水平的影响'>5. 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡培养液中SOD水平的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡细胞释放NO水平的影响'>6. 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡细胞释放NO水平的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡eNOS,iNOS基因表达的影响'>7. 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡eNOS,iNOS基因表达的影响
  • （三） 数据分析
  • 二、结果
  • （一） MTT检测结果
  • 2O2诱导HUVEC损伤的影响'>1. 相同作用时间,不同浓度大蒜素对H2O2诱导HUVEC损伤的影响
  • 2O2诱导HUVEC损伤的影响'>2. 相同浓度大蒜素,作用不同时间对H2O2诱导HUVEC损伤的影响
  • 2O2诱导HUVEC损伤的影响'>3. 不同浓度大蒜素预作用6h,对H2O2诱导HUVEC损伤的影响
  • （二） Western-blot结果
  • （三） 培养液中MDA水平检测结果
  • （四） 培养液中SOD水平检测结果
  • （五） 细胞释放NO水平检测结果
  • （六） RT-PCR结果
  • 三、讨论与分析
  • 2O2诱导HUVEC凋亡的影响'>（一） 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡培养液中MDA、SOD水平的影响'>（二） 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡培养液中MDA、SOD水平的影响
  • 2O2诱导HUVEC凋亡NO,eNOS,iNOS水平的影响'>（三） 大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡NO,eNOS,iNOS水平的影响
  • 四、小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 文献综述
  • 参考文献

    • 相关论文文献

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