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狂犬病病毒保护性抗原基因重组伪狂犬病毒/杆状病毒活疫苗的实验研究

2020-12-11阅读(492)

狂犬病病毒保护性抗原基因重组伪狂犬病毒/杆状病毒活疫苗的实验研究

论文摘要

狂犬病是以恐水、畏光和狂躁等症状为特征的一种古老的人畜共患病。几乎所有温血动物都能感染狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）并造成中枢神经系统损伤,形成致死性的脑脊髓炎。在发达国家,通过对犬的严格管理和预防免疫,已基本消除了犬狂犬病,从而有效控制住了人类狂犬病。在中国,犬是狂犬病病毒侵入人群的主要传染源和传播媒介,由犬传播导致人感染的病例约占狂犬病总数的85%-90%。因此,控制犬狂犬病并使人类免受狂犬病病毒的侵害,主要手段仍是犬的常规免疫以及人类的暴露前、暴露后免疫。本研究对兽用狂犬病病毒新型活疫苗进行了新的探索,主要研究内容如下：1.表达狂犬病病毒ERA株和CTN株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（TK-/gE-/2G+）的构建、鉴定及免疫研究伪狂犬病病毒具有清楚的遗传背景、稳定的遗传特点、广泛的宿主范围、较高的增殖滴度、较大的外源基因插入容量（可容纳至少40kb）及不感染人等优点。因此本研究以伪狂犬病病毒Ea株的TK-/gE-/LacZ+变异株为载体构建重组病毒PRV-（TK-/gE-/2G+）,并经PCR、southern blot和western blot鉴定正确。重组病毒免疫Balb/c小鼠,首免后3周就能检测到针对糖蛋白的ELISA抗体,二免后2周ELISA抗体有所升高但差异不显著,MTS的结果显示重组病毒激发机体产生了较高的细胞免疫,但未检测到狂犬病病毒中和抗体。重组病毒免疫犬,犬很敏感,均在两周内死亡,表明该致弱的伪狂犬病病毒载体对犬的安全性有待商榷。2.表达狂犬病病毒SRV9株核蛋白和糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（Bartha-SN-SG）的构建、鉴定及免疫研究基于前期的伪狂犬病病毒对犬的安全性的考虑,改用天然致弱,后期缺失毒力因子gG的伪狂犬病病毒Bartha-gG-/EGFP+株为载体构建重组病毒PRV-（Bartha-SN-SG）,并经荧光显微镜观察、PCR和western blot鉴定构建正确。重组病毒免疫Balb/c小鼠,首免后3周能检测到针对糖蛋白的ELISA抗体,二免后2周ELISA抗体升高但差异不显著,MTS的结果显示重组病毒激发了较高的细胞免疫,但中和抗体均为阴性。重组病毒以105TCID50免疫犬,免疫原性略差,中和抗体均为阴性,但该致弱重组病毒未对犬表现出致病性。3.表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒BV-VSV/G-G的构建、鉴定及免疫研究研究发现杆状病毒不能感染哺乳动物细胞,但是可以进入多种哺乳动物细胞中,通过合适的哺乳动物启动子表达外源基因,自身的基因组并不复制和表达,但是哺乳动物血清中的补体系统能抑制杆状病毒。已有研究发现膜上展示有水泡性口炎病毒融合糖蛋白（VSV-G）的杆状病毒粒子对补体系统有极强的耐受性,并能利用VSV-G的融合作用介导细胞间的融合。因此本研究构建了表面展示有VSV-G的表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒并对所构建的重组病毒进行免疫效力研究。重组病毒免疫ICR小鼠,首免后3周和二免后2周ELISA抗体及MTS刺激指数均超过伪狂犬重组病毒,二免后两周可检测到狂犬病病毒中和抗体（VNA>0.5 IU/mL）,最高可达10.26 IU/mL,并呈剂量依赖性。重组杆状病毒免疫犬,均能产生中和抗体（VNA>0.5 IU/mL）,但中和抗体水平个体差异比较大。获得的三株重组病毒做比较,表明重组杆状病毒作为RABV候选疫苗株更具有良好的应用前景。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 第一篇 文献综述
  • 第1章 狂犬病病毒分子生物学研究进展
  • 第2章 伪狂犬病病毒的细胞生物学和分子特征研究进展
  • 第3章 杆状病毒在昆虫和哺乳动物细胞中作为高效载体的研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • -/gE-/2G+）的构建、鉴定及免疫研究'>第1章 表达狂犬病病毒ERA株和CTN株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（TK-/gE-/2G+）的构建、鉴定及免疫研究
  • 1 材料
  • 2 重组病毒的构建
  • -/gE-/2G+重组病毒的鉴定'>3 TK-/gE-/2G+重组病毒的鉴定
  • 4 动物实验
  • 5 结果
  • 6 讨论
  • 7 小结
  • 第2章 表达狂犬病病毒SRV9株的核蛋白和糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（Bartha-SN-SG）的构建、鉴定及免疫研究
  • 1 材料
  • 2 重组病毒的构建
  • 3 重组病毒的鉴定
  • 4 动物实验
  • 5 结果
  • 6 讨论
  • 7 小结
  • 第3章 表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒BV-VSV/G-G的构建、鉴定及免疫研究
  • 1 材料
  • 2 重组杆状病毒的构建
  • 3 动物实验
  • 4 结果
  • 5 讨论
  • 6 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 作者简介
  • 导师简介
  • 致谢

    • 相关论文文献

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