猪2型链球菌新型双元系统ResS/ResR致病机理的研究

论文摘要

细菌已经进化成了相当成熟的机制用以监测,适应环境,然后对宿主给与的防御机制以致命的攻击。对与病原菌来说,它们已经演生出了各种毒力因子以及其调控系统来适应宿主的内生境,从而确保它们在宿主体内的生存。一种在许多细菌中共存的调控系统——双元调控系统近几年来被广泛关注。在本实验中,作者也详细研究了猪2型链球菌中的一个新型双元系统tesS—resR,试图了解它如何调节猪2型链球菌的毒力因子,代谢基因和怎样适应宿主体内的恶劣内生境的。作者对2型猪链球菌（Streptococcus suis 2）的一个新型的双元调控系统（TCS）resS—resR进行了详细的结构和功能上的分析。为了检测resS—resR双元系统对细菌致病力的作用,作者构建了三个缺失突变株△resR,△resS,△resS/R和它们相应的回复互补菌株△resR—pAT18resR,△resS—pAT18resS,△resS/R—pAT18resS/R。作者比较了它们和野毒株之间的生化特性,基因表达量和毒力强弱等。△resS/R双缺失表现出了一系列的表型变化,包括溶血性的几乎完全丧失和下降的唾液酸含量。在细胞实验中,相较于野毒株而言,三个缺失突变株都对Hep-2细胞表现出了黏附力的下降。各个菌株的相对毒力也在CD1实验老鼠上进行了比较。在小鼠LD50实验中,△resS/R双缺失菌株组的值较之野毒株组增加了2个log值。在小鼠组织感染实验中,同样以野毒株组为对照,△resS/R双缺失菌株组表现出毒力明显下降,临床和病理学检测的差异也很大。另外两个突变株组的现象却与野毒株差别不大。在用real-time PCR进行体内体外检测△resS/R双缺失菌株组中基因表达量时,sly、mrp和ef等主要毒力因子的表达量下降明显。这都说明resS—resR双元系统对2型猪链球菌的毒力至关重要。实验证据表明了△resS/R双缺失突变株对宿主体内的恶劣内生境接受的信号不再那么强烈,反应不再敏感,从而表现出了一些重要的生化指标上的缺失,丧失了溶血活性,在细胞实验中降低了黏附和定植力度,在小鼠模型实验中表现出急剧的毒力减弱。基于以上实验结果和荧光定量PCR对重要毒力基因表达量的检测,作者认为从发病猪身上分离到的2型猪链球菌在体外标准培养基培养和在宿主体内中的生长情况大不相同。因此作者推断SS2的转录后的修饰作用对2型猪链球菌产生溶血素和增加宿主体内的定植力意义重大。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一篇 文献综述
• 第一章 2型猪链球菌毒力因子及致病机制的研究进展
• 1.猪链球菌临床症状及致病机理概述
• 2.猪2型链球菌毒力因子的研究进展
• 第二章 细菌二元调控系统研究概述
• 1.细菌二元调控系统与细菌毒力的关系
• 2.链球菌属的双元系统概述
• 第二篇 研究方案
• 第一章 研究目的和意义
• 第二章 实验材料
• 第三章 实验方法
• 第三篇 实验结果与分析
• 1 双元系统感应蛋白和调节蛋白的基因结构分析及克隆
• 2 载体构建及酶切、测序鉴定
• 3 生化系列检测
• 4 细胞实验
• 5 动物实验
• 6 体内体外SS2各毒力因子表达差异检测
• 第四篇 讨论与结论
• 参考文献
• 致谢
• 简历