论文摘要
本文目的在于研究模式植物盐芥EST库中某未知基因的生物学功能,因此将多种鉴定方法用于同一基因的功能的研究。通过多种方法,研究了盐芥EST库中某未知基因的功能,并推测该基因在盐芥耐盐机制中的作用。在200mM的NaCl处理的45日龄小盐芥（山东东营）地上部分构建的λZap-cDNA文库（EST文库）中,筛选到的第100（BI698705）号序列是一个未知蛋白,我们命名为NOVEL蛋白。通过对其序列特征、基因结构的分析得知该蛋白基因全长序列为474bp,编码158个氨基酸（158AA,大约18KD）。该未知蛋白在该EST库中相比于对照表达丰度较高,并且在大约1580个标签中该基因检测到六个,均为表达丰度较高的基因。通过软件分析描述该蛋白可能定位于核内。该蛋白分子较小,推测该蛋白可能具有NaCL诱导下转录调控元件的特性,将重点研究其功能与作用。Northern-Blotting分析表明小盐芥在200mmol/LNaCl处理不同时间下的该基因在盐芥地上部分表达量明显高于对照,随时间的延长该基因在盐芥地上部分中的表达量会增加,48hr达到最高;用不同浓度的NaCl处理盐芥24小时,发现不同浓度NaCl处理后该基因在盐芥地上部分的表达量也有所升高,其中在150mM NaCl处理下转录水平最高,而在200 mM NaCl处理下转录水平又开始略微下降;该基因在4℃低温处理下的表达量显著提高,3小时其表达量达最高,随着处理时间的延长Novel基因的表达量又逐渐降低;该基因在40℃高温处理下表达量变化趋势不明显。该基因在盐芥中的沉默株系中,在NaCL（200mmol/L）及长期（45天）冷（4℃）处理下并未见较明显表现型;该基因在拟南芥中的过量表达株系,进行了多组处理。野生型和转基因拟南芥生长45天后,用200mM NaCl处理24小时,处理中转基因拟南芥生长状况均好于野生型;在氧化胁迫处理实验中,0.5μM甲基紫精（Methyl Viologen MV）处理对于拟南芥野生型的伤害作用更大;2μMABA（脱落酸）处理的生长形势来看,对于野生型来说,发芽率以及生长情况都不及
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