论文题目: HMGN2的亚细胞定位及其重组免疫毒素的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 病理学与病理生理学
作者: 熊文碧
导师: 王伯瑶
关键词: 亚细胞定位,抗菌肽重组免疫毒素,铜绿假单胞菌外毒素
文献来源: 四川大学
发表年度: 2005
论文摘要: 内源性抗菌肽是天然免疫的重要介质，是炎症反应起保护作用的重要分子基础。寻找新的抗菌肽分子一直是科学家梦寐以求的愿望。高迁移率组蛋白N2(High Mobility Group Chromosal protein N2，HMGN2)是脊椎动物和非脊椎动物的细胞核中普遍存在的非组蛋白，目前对其功能还不完全清楚。在本实验室从人LAK细胞和人宫颈黏液中分离纯化寻找抗菌肽过程中，发现HMGN2具有较强的抗革兰氏阴性菌的作用，为进一步证实其参予机体天然免疫的可能性，及其可能机制，本文重点研究其在细胞内的定位及利用其α螺旋结构域较强的跨膜能力及肿瘤导向力，构建重组免疫毒素，以期用于肿瘤的靶向治疗。 本文分三个部分。 第一部分是从本室已构建的pGEX-1λT-HMGN2大肠杆菌表达载体经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导高效表达出GST-HMGN2融合蛋白，进一步用GST亲合层析柱分离纯化得到较纯的GST-HMGN2融合蛋白，免疫新西兰兔，成功制备出较高效价的HMGN2特异多克隆抗体，初步用于THP-1细胞中HMGN2的亚细胞定位分析，发现在LPS刺激下，免疫细胞化学染色显示HMGN2不仅分布于单核吞噬细胞核，还分布于细胞浆，并且ELISA法也显示可释放到细胞外。 第二部分为进行HMGN2的亚细胞定位分析，提取人LAK细胞总RNA，设计合成相应引物，应用RT-PCR从其总RNA中扩增HMGN2 cDNA，以pcDNA3.1-myc-his和pEGFP-N1为载体，成功构建出HMGN2真核表达载体，转染Hela细胞，转染效率达70％～80％，用抗六组氨酸臂的单克隆抗体经免疫细胞化学染色显示经pcDNA3.1-myc-his-HMGN2转染的Hela细胞除细胞核外，胞浆亦明显着色，未转染的Hela细胞无论细胞核还是细胞浆均显阴性；用兔抗人HMGN2多克隆抗体进行的免疫细胞化学染色显示转染的Hela细胞与用抗六组氨酸臂的单克隆抗体检测结果相同，而未转染的Hela细胞核内和胞浆也均有
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 重组HMGN2融合蛋白及其抗体的制备
一 材料和方法
二 结果
三 讨论
四 小结
第二部分 HMGN2的亚细胞定位研究
一 材料和方法
二 结果
三 讨论
四 小结
第三部分 HMGN2α-螺旋与PE38Ⅲ结构域融合蛋白的制备及功能研究
一 材料和方法
二 结果
三 讨论
四 小结
参考文献
文献综述
一 HMGN2的研究进展
二 铜绿假单胞菌外毒素A与肿瘤治疗
附录
个人简介
致谢
发布时间: 2007-01-23
参考文献
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标签：亚细胞定位论文; 抗菌肽重组免疫毒素论文; 铜绿假单胞菌外毒素论文;