论文摘要
第一部分:幼年大鼠阿霉素肾病模型的复制目的:复制幼年大鼠阿霉素肾病模型,为后续研究奠定基础。方法:4-5周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组、阿霉素肾病组（模型组）。一次性尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg体重,建立阿霉素肾病模型。各组分别于注射阿霉素后第2、4、8、12周末处死8只大鼠,观察24h尿蛋白水平、血清生化指标和形态学改变。结果:注射阿霉素2周后,模型出现大量蛋白尿、低白蛋白血症和高脂血症,持续至第12周。模型早期病变呈微小病变型肾病综合征,从第8周开始出现局灶节段性肾小球硬化,肾小球硬化进行性加重并伴有肾功能不全。结论:成功复制幼年大鼠阿霉素肾病模型,病理改变由微小病变型肾病综合征发展为局灶节段性肾小球硬化症。第二部分:SREBP-LDLr途径在脂质介导阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中的作用研究目的:探讨阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中,脂质沉积和胆固醇调节元件结合蛋白-2（SREBP-2）、低密度脂蛋白受体（LDLr）的作用。方法:酶比色法检测肾组织内胆固醇含量,油红O染色检测肾组织内脂肪沉积情况,半定量RT-PCR技术检测肾组织LDLr、SREBP-2 mRNA表达,Western-blotting技术检测LDLr、SREBP-2蛋白表达。结果:第8周和第12周模型组肾组织内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量呈进行性升高,均高于对照组（P<0.01）,肾组织内胆固醇含量和肾小球硬化呈显著正相关性（P<0.01）;LDLr、SREBP-2 mRNA及蛋白质表达呈时间依赖性上调,均高于对照组（P<0.01）。结论:阿霉素肾病大鼠肾脏细胞内胆固醇浓度对LDLr正常反馈调节机制被破坏,导致SREBP-2、LDLr过度表达,胆固醇可能通过上调的SREBP-LDLr途径在肾脏组织大量沉积,加重肾脏损害。第三部分:炎症在脂质介导阿霉素肾病大鼠肾小球硬化过程中的作用研究目的:探讨炎症在脂质介导阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中的作用。方法:免疫组化法检测肾组织中白细胞介素-1β（IL-1β）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的定位表达,半定量RT-PCR技术检测肾组织IL-1βmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测血清和肾组织中IL-1β的水平,Western-blotting技术检测肾组织核因子-κB（NF-κB）的表达。结果:第8周和第12周模型组肾脏NF-κB蛋白表达均高于对照组（P<0.01）,且呈时间依赖性增强,同时IL-1βmRNA和蛋白表达及TGF-β1蛋白表达均高于对照组（P<0.01）,也呈时间依赖性增强。结论:阿霉素肾病大鼠肾脏局部NF-κB活性明显上调,伴有以IL-1β表达升高为主要表现的炎症状态,肾脏局部炎症状态加重肾小球硬化程度。第四部分:辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠肾脏保护作用的机制目的:观察辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠的保护作用并探讨其机制。方法:在第一部分实验建立幼年阿霉素肾病大鼠模型的同时,设立阿霉素肾病辛伐他汀治疗组（治疗组）。注射阿霉素6d后,每天于固定时间,治疗组给予辛伐他汀3mg/kg体重灌胃,对照组和模型组灌注等量生理盐水,灌胃给药11周。各组分别于注射阿霉素后第2、4、8、12周末处死8只大鼠,观察比较各组生化指标、形态学改变、肾脏脂质沉积和炎症因子表达情况。结果:各观察时间点,治疗组和模型组血脂水平无统计学差异,第4、8周治疗组24h尿蛋白水平低于模型组（P<0.05和P<0.01）,第12周治疗组血清肌酐低于模型组（P<0.05）,第8周和第12治疗组肾小球硬化指数低于模型组（P<0.01）,第8、12周治疗组肾脏NF-κB、IL-1β和TGF-β1表达均较模型组低（P<0.01或P<0.05）,治疗组LDLr、SREBP-2表达较模型组低（P<0.01或P<0.05）,组织内胆固醇含量较模型组低（P<0.01或P<0.05）。结论:辛伐他汀可以不依赖于其降血脂效应对阿霉素肾病大鼠发挥肾脏保护作用;辛伐他汀抑制肾脏局部炎症反应,并可能通过抑制炎症对SREBP-2、LDLr反馈调节机制的破坏,从而下调阿霉素肾病大鼠肾脏SREBP-2、LDLr表达,减少胆固醇在肾脏的沉积,发挥肾脏保护作用。
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