WNT信号通路抑制因子WIF-1在肝癌细胞中的作用

论文摘要

人肝细胞性肝癌（Human hepatocellular carcinoma,HCC）是一种比较常见的恶性肿瘤,在许多国家特别是中国它的发病率比较高,但是目前人们对它的发生和发展的分子机理还不是很清楚。最近,在人类多种肿瘤包括肝细胞性肝癌中都发现有异常活化的WNT信号通路,暗示WNT信号通路在肿瘤的发生发展中起了重要的作用。WNT信号通路在调节个体的胚胎发育,参与细胞多种生理性活动中起重要的作用。当胞质外的WNT蛋白同膜上的受体Frizzled（Fz）结合,将细胞外的信号传递到细胞内,抑制GSK3β（glycogen synthase kinase 3β）-Axin-APC（adenomatous polyposis coli）多蛋白复合物的磷酸激酶活性,β-catenin蛋白由于无法被磷酸化就在细胞质中大量积聚。这时,β-catenin蛋白进入核中,与TCF（T-cell factor）/LEF（Lymphocyte enhancerfactor）家族的转录因子相结合,激活一系列基因的转录。国内外研究报道,在大多数肝癌细胞中WNT信号通路处于异常活化状态的,但是APC或β-catenin在肝癌中的突变率却不高,因此暗示我们在肝癌中可能存在其他的机制导致WNT信号通路的异常活化。WIF-1（WNT inhibitory factor-1）是WNT信号通路一种细胞外的分泌型抑制因子,对WNT通路起抑制作用。而该基因在人类多种肿瘤中均出现低表达和启动子区高基化的现象,但是目前在肝癌中还没有相关的研究。我们发现WIF-1在几种肝癌细胞中的表达水平比正常肝组织要低,并且这种低表达现象与启动子区高甲基化有关。通过甲基化特异性分析和测序分析了WIF-1启动子区40个CpG岛的甲基化情况,结果发现WIF-1在肝癌细胞中的甲基化概率是（5/8;63.5%）,通过去甲化试剂5-aza-2-deoxycytidine处理几种WIF-1处于甲基化状态的肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2、BEL-7402,结果发现WIF-1的表达水平都有不同程度的恢复,进一步验证了它的表达情况与甲基化状态有关。为了探讨WIF-1的下调表达对肝癌发生的影响,我们将质粒pcDNA3.1-WIF-1瞬时转染肝癌细胞SMMC-7721,空载pcDNA3.1作为对照。结果发现外源性WIF-1的表达对SMMC-7721的生长产生了明显的抑制作用,暗示WIF-1作为潜在的抑癌基因对肝癌细胞生长有负调节的作用。我们通过克隆形成实验验证了这一作用。用G418筛选三周后,发现转染了pcDNA3.1-WIF-1的SMMC-7721的克隆数,比转染了空载pcDNA3.1的明显减少。这些都说明WIF-1对肝癌细胞的生长具有抑制作用,这种作用可能是通过抑制WNT信号通路来发挥的。综上所述:我们发现在肝癌细胞中WIF-1的表达下调的现象,而这种现象与它启动子的高甲基化有关,并且WIF-1通过抑制WNT信号通路来抑制肝癌细胞的生长,暗示WIF-1作为肝癌中潜在的抑癌基因,可望应用于肝癌的临床治疗。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 WIF-1在肝癌细胞中的甲基化状态分析
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 WIF-1抑制肝癌细胞SMMC-7721生长
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 致谢