EMO和RH对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响

论文摘要

本研究采用SD 大鼠脂肪组织的基质血管细胞分离培养大鼠的前体脂肪细胞。探讨了使前体脂肪细胞达到良好的增殖与分化状态的培养液条件。在此基础上,应用油红O染色提取法、形态学观察、MTT 比色、流式细胞术等方法,检测了中药成分大黄素和大黄酸对大鼠前体脂肪细胞分化、增殖和凋亡的影响,并初步探讨了其作用机制。为进一步应用大黄素和大黄酸药剂或添加剂调控人和动物的体脂沉积提供了依据。从而有望改善中药时效性,发挥其多层次、多靶位点的药理作用。本研究包含以下几方面内容:　1、研究使大鼠前体脂肪细胞达到良好增殖与分化状态的培养液培养液条件。通过设置养分起始浓度不同的四类培养液,分别添加一定浓度梯度的L-Gln,培养大鼠前体脂肪细胞。采用形态学观察、MTT 比色、油红O 染色提取法,　比较各组细胞形态以及增殖与分化的效果。结果表明,新鲜培养液添加0　mmol/L 的L-Gln;培养液配制后4℃冷藏20d,再添加0.685　mmol/L 的L-Gln,均较利于前体脂肪细胞增殖与分化;培养液配制后4℃冷藏90d,对前体脂肪细胞培养效果较差,添加L-Gln 也不能得到改善。另外,启封后的M199 和胎牛血清分别冷藏不宜超过90d。　2、研究大黄素和大黄酸对大鼠前体脂肪细胞分化的影响。采用油红O 染色提取法、形态学观察法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化以及前体脂肪细胞充脂率、充脂程度及形态变化。结果表明,大黄素和大黄酸对大鼠前体脂肪细胞的分化呈剂量和时间依赖性地抑制作用,且大黄素的抑制作用强于大黄酸。大黄素更显著地表现为抑制脂肪合成,促进脂肪分解,大黄酸则更显著地表现为促进脂肪分解和诱导脂肪细胞凋亡。　3、研究大黄素和大黄酸对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响。采用MTT 比色法、流式细胞术分别检测大黄素和大黄酸作用下,前体脂肪细胞增殖力、细胞周期的变化以及细胞凋亡情况。结果表明,大黄素和大黄酸抑制大鼠前体脂肪细胞增殖的有效剂量范围分别为20-160umol/L 和5-160umol/L;在有效剂量范围内,大黄素和大黄酸对前体脂肪细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性变化且大黄素和大黄酸抑制前体脂肪细胞增殖的作用表现在细胞周期的不同时相上,且均可不同程度地诱发前体脂肪细胞凋亡。　以上研究得出如下结论:一,及时满足培养液中L-Gln 的需求量,可使前体脂肪细胞达到较好的增殖与分化状态。二,大黄素和大黄酸均可剂量和时间依赖性抑制前体脂肪细胞增殖与分化,具有潜在的减肥降脂作用,但二者的作用机制可能不同。

论文目录

• 文献研究
• 前言
• 第一章 前体脂肪细胞分化的研究进展
• 1.1 脂肪细胞分化的干细胞学说
• 1.2 前体脂肪细胞分化的研究进展
• 1.2.1 研究材料
• 1.2.2 前体脂肪细胞分化的表型特征
• 1.2.3 前体脂肪细胞分化不同阶段的标志
• 1.2.4 前体脂肪细胞分化过程中的转录调控
• 1.2.5 前体脂肪细胞分化过程中的激素调节
• 1.2.6 脂肪细胞因子对前体脂肪细胞分化的影响
• 1.2.7 外源因子对前体脂肪细胞分化的影响
• 第二章 前体脂肪细胞增殖与凋亡的研究进展
• 2.1 前体脂肪细胞增殖研究进展
• 2.1.1 前体脂肪细胞增殖的特点
• 2.1.2 细胞周期概述
• 2.1.3 细胞周期的调控机制
• 2.1.4 细胞周期调节失控与相关疾病
• 2.2 前体脂肪细胞凋亡研究进展
• 2.2.1 细胞凋亡的含义和生物学特性
• 2.2.2 细胞凋亡的信号转导机制
• 2.2.3 与细胞凋亡相关的生物因子
• 第三章 EMO和RH的药理作用研究进展
• 3.1 EMO的药理作用
• 3.2 RH的药理作用
• 3.3 EMO和RH的毒副作用
• 实验研究
• 第四章 L-Gln对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 第五章 EMO和RH对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响
• 5.1 EMO和RH对大鼠前体脂肪细胞分化的影响
• 5.1.1 材料与方法
• 5.1.2 结果
• 5.1.3 讨论
• 5.2 EMO和RH对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响
• 5.2.1 材料与方法
• 5.2.2 结果
• 5.2.3 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介