水产品中多种喹诺酮类药物残留量检测方法的研究

论文摘要

喹诺酮类（Quinolones）药物是一类人工合成的人畜共用抗生素类药物,对革兰氏阴性菌和阳性菌、支原体、衣原体等有抗菌作用,常被用于水产养殖中的病害防治。随着人们对食品安全问题的关注,渔药残留问题不仅成为各国相关部门关注的焦点,也是普通民众关心的社会问题。近年来常用于水产品中药物残留的检测方法主要有:酶联免疫测定法、毛细管电泳法、气相色谱法、高效液相色谱法和联用技术。其中,高效液相色谱法和液质联用技术是目前应用较多的方法,但是大部分方法仅限于测定一种或少数几种喹诺酮类药物。本论文旨在建立水产品中同时检测多种喹诺酮类药物的高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法。主要进行以下4方面研究:1)研究建立同时检测水产品中6种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱法。根据高效液相色谱的特点,比较了不同的液相色谱柱对该类药物的分离效果,考察了对分析效果有重要影响的流动相组成及配比、pH、流速、柱温、最适发射和激发波长等液相色谱条件;对前处理过程中样品的提取、净化步骤进行了对比优化;通过对方法的检测限和加标回收率的验证,考察方法的稳定性、准确度和适用范围。经反复实验探索,最终确定了以酸化乙腈溶液提取样品中残留的恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、噁喹酸和氟甲喹,正己烷脱脂,Varian Bond Elut C18固相萃取小柱净化,经Zorbax Elipse XDB- C18（150 mm×4.6 mm,5μm）柱分离,用高效液相色谱荧光检测法测定,外标法定量。实验结果显示,标准品线性关系良好,测得各种药物加标回收率均在75.0%以上,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和氧氟沙星检测限为5μg/kg,噁喹酸和氟甲喹检测限为10μg/kg,相对标准偏差均在10.00%以内。2)建立了同时检测水产品中19种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱-串联质谱法。试样中19中喹诺酮类药物用甲酸-乙腈溶液（1:99,V/V）提取,乙腈饱和正己烷净化,用含2 mmol/L乙酸铵的0.2%甲酸-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,SRM扫描方式进行测定,外标法定量。1、5、20μg/kg 3种浓度水平下进行加标回收实验,每个水平重复测定6次,平均回收率为76.1%116.0%,相对标准偏差3.20%13.10%。空白样品中添加19种1μg/kg的喹诺酮类药物标准溶液,经测定其中17种药物重复测定平均回收率可达到75.0%以上,氟罗沙星和吡哌酸在2μg/kg浓度下重复测定平均回收率可达到75.0%以上,表明17种喹诺酮类药物检测限可达到1μg/kg,氟罗沙星和吡哌酸检测限可达到2μg/kg。最后选取青蟹、鲈鱼、虾、鳗鱼、草鱼、鲍鱼、甲鱼和牡蛎,在5μg/kg加标浓度下进行验证测定,回收率在77.6%102.0%,RSD在13.00%以内。3)探讨了上述两种检测方法的不确定度来源并对其进行了分析评定,对测量结果的可靠性有了一个直观的描述,对结果的质量进行了更加完整的定量描述。通过对测量结果的不确定度分析找到实验过程中容易对结果造成较大影响的因素,从而采取相应措施减小或避免这些影响。经分析评定,发现对测量结果影响较大的不确定度分量主要来源于标准品的配制过程和加标回收的影响,这两个环节的检测过程中需引起重视。4)建立的水产品中6种喹诺酮类药物检测的高效液相色谱法已制定成行业标准,并已报送农业部标准管理部门等待审定,高效液相色谱-串联质谱法也将制定成地方标准。本课题建立的针对水产品中多种喹诺酮类药物残留量的两种检测方法,样品前处理方法简便、准确,可同时快速检测多种该类药物残留量,既节约了成本,又节省了时间。通过大量实验验证,对于日常药物残留量检测工作具有实际的参考和应用价值。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 渔用兽药残留危害及控制
• 1.1.1 渔用兽药残留的来源和危害
• 1.1.2 渔用兽药残留的控制
• 1.2 残留分析技术现状
• 1.2.1 前处理技术
• 1.2.2 检测技术
• 1.3 国内外检测喹诺酮类药物的HPLC 法和HPLC-MS/MS 法
• 1.4 立论依据、目的和意义
• 第2章 HPLC 法同时检测水产品中6 种喹诺酮类药物残留的研究
• 2.1 引言
• 2.2 高效液相色谱法检测原理
• 2.3 实验部分
• 2.3.1 实验仪器设备
• 2.3.2 主要试剂
• 2.3.3 标准溶液配制
• 2.3.4 色谱条件
• 2.3.5 样品制备
• 2.3.6 样品提取和净化
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 液相色谱分析条件的确定
• 2.4.2 样品前处理方法的确定
• 2.4.3 方法回收率和精密度
• 2.4.4 方法的检测限及线性范围
• 2.4.5 本方法的验证
• 2.5 本章小结
• 第3章 HPLC-MS/MS 法测定水产品中多种喹诺酮类药物残留量的研究
• 3.1 引言
• 3.2 方法原理
• 3.3 实验部分
• 3.3.1 实验仪器
• 3.3.2 主要试剂
• 3.3.3 标准溶液配制
• 3.3.4 色谱条件
• 3.3.5 质谱条件
• 3.3.6 样品制备
• 3.3.7 样品提取和净化
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 样品前处理
• 3.4.2 色谱柱的选择
• 3.4.3 仪器条件优化选择
• 3.4.4 标准曲线线性范围
• 3.4.5 加标回收率和精密度
• 3.4.6 不同样品加标回收实验
• 3.5 本章小结
• 第4章 测定水产品中喹诺酮类药物的不确定度分析
• 4.1 引言
• 4.2 高效液相色谱法检测水产品中多种喹诺酮类药物残留量的不确定度评估
• 4.2.1 实验部分（详见第二章）
• 4.2.2 测定喹诺酮类药物残留量不确定度计算（以氧氟沙星为例）
• 4.2.3 结果与分析
• 4.2.4 标准不确定度的合成
• 4.2.5 结论
• 4.3 液质联用法测定水产品中喹诺酮类药物残留量的不确定度评定
• 4.3.1 被测量值的数学模型
• 4.3.2 各分量不确定度计算（以噁喹酸为例计算）
• 4.3.3 标准不确定度的合成和扩展
• 4.3.4 水产品中喹诺酮类药物含量的测量结果及不确定度报告
• 4.3.5 结论
• 4.4 本章小结
• 第5章 课题总结和展望
• 5.1 对本课题的总结
• 5.2 实验不足和课题展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 在学期间发表的学术论文