刺参抗菌肽的分离纯化及活性检测

论文摘要

仿刺参（Apostichopus japonicus Selenka）,也称为刺参（sea cucumber）,在分类学中隶属于棘皮动物门（Phylum Echinodermata）,海参纲（Class Holothuroidea）,楯手目（Order Aipidochirotida）,刺参科（Family Stichopodidae）,仿刺参属（Genus Apostichopus）。刺参具有很高的营养价值和经济价值。抗菌肽是生物体产生的一类小分子多肽,对真菌、细菌等病原微生物具有抑制或杀灭作用,已发现的抗菌肽广泛存在于细菌、真菌、昆虫、被囊动物、两栖类动物、甲壳类动物、鸟类、鱼类、哺乳动物乃至人类,以及植物在内的所有生物体中。本实验是对大连沿海养殖仿刺参抗菌肽的初步研究。通过有机溶剂（甲醇）来提取仿刺参消化道的抗菌肽,并对粗提物进行层析纯化,然后利用纯化的样品进行对大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aweus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）和乳链球菌（Streptococcus lactis）、噬菌蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovorus）的抑菌实验,通过MTT法来确定本提取物对以上5种菌的最小抑菌浓度,并对粗提物的各个组分进行了Tricine-SDS-PAGE电泳和高效液相色谱的分析。实验发现,粗提物经过葡聚糖凝胶层析一共可以分离出两个洗脱峰,分别命名为F1,F2,其中F2对大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aweus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）和乳链球菌（ Streptococcus lactis ）、噬菌蛭弧菌（Bdellovibrio bacteriovorus）具有很明显的抑制效果,并计算出该组分对以上5种菌的最低抑菌浓度（MIC值）,对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、乳链球菌和噬菌蛭弧菌的MIC值为1.25 mg/ml ,1.25 mg/ml ,1.25 mg/ml ,2.5 mg/ml和0.625mg/ml。经过Tricine-SDS-PAGE电泳,发现F2的分子量为6KD左右,高效液相色谱检测结果显示F2组分很复杂,色谱图中有多个洗脱峰出现。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 抗菌肽的研究概况
• 1.1.1 抗菌肽的结构特点
• 1.1.2 海洋动物的抗菌肽
• 1.1.3 抗菌肽的作用机理
• 1.1.4 抗菌肽的应用
• 1.2 刺参的养殖及病害
• 1.2.1 刺参的分类地位、生物学特征和分布
• 1.2.2 刺参的养殖与存在问题
• 1.2.3 刺参的免疫学研究
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要药品与试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 粗样品的提取
• 2.2.2 粗样品的检测
• 2.2.3 样品的初步纯化
• 2.2.4 样品的活性检测
• 2.2.5 纯化样品的凝胶电泳
• 2.2.6 纯化样品的活性检测
• 2.2.7 纯化样品的色谱分析
• 3 结果
• 3.1 刺参抗菌肽粗提物的收获率
• 3.2 粗样品检测的结果
• 3.3 样品初步纯化的结果
• 3.4 样品活性检测的结果
• 3.5 纯化样品凝胶电泳的结果
• 3.6 纯化样品活性检测的结果
• 3.7 纯化样品色谱分析的结果
• 4 讨论
• 4.1 刺参抗菌肽的提取方法及特点
• 4.2 刺参抗菌肽抑菌特征
• 4.3 刺参抗菌肽的纯化
• 4.4 实验条件的优化
• 4.4.1 SephadexG-50 柱层析条件的优化
• 4.4.2 凝胶电泳条件的优化
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 论文发表情况