磁性氧化硅复合微球表面氨基的定量检测方法研究

论文摘要

本课题研究的目的是要建立一种应用于氧化硅包覆磁球表面微量氨基密度的检测方法。在对文献进行充分调研的基础上,选择了荧光胺法以及ITL/BCA法作为主要研究的两种方法。本文首先以实验室制备的氨基改性氧化硅磁球为待检测物,建立基于氧化硅磁性微球的荧光胺定量检测表面氨基基团密度的方法。通过实验选择反应体系pH值为8.0,标准溶液与荧光胺反应时间为20min,磁性微球样品水解反应60h,优化并建立了基于氧化硅磁性微球表面氨基的荧光胺定量检测方法,对检测方法进行批内、批间偏差的评价,并且对自制的氧化硅磁性微球表面氨基进行测试。结果显示,实验的批间误差小于25%,批内误差小于10%。标准曲线的最低检出值为0.074mmol/g。此方法基本可以满足低密度氨基样品的检测需要,并且具备较好的准确性及稳定性。其次,以本实验室制备的氨基改性氧化硅磁球为待检测物,建立了基于氧化硅磁性微球的ITL/BCA定量检测固相载体表面氨基基团方法。通过实验,选择样品反应最佳温度为60℃,反应时间为1h,ITL试剂最佳浓度为40mM,研究了使用BCA试剂与MicroBCA试剂对于反应的差别,优化并建立了基于氧化硅磁性微球表面氨基的荧光胺定量检测方法,对检测方法进行批内、批间偏差的评价,并且对自制的氨基氧化硅磁性微球、氨基二氧化硅微球和PEI接枝二氧化硅微球表面氨基进行测试。结果显示,此方法基本可以满足低密度氨基样品的检测需要,并且具备较好的准确性及稳定性。最后,在已经建立的ITL/BCA方法基础上,提出了差减法,并确定了此方法的最佳反应时间为3h,实验结果与ITL/BCA法所测结果具有相同的数量级,并且避免了ITL/BCA法中样品本身干扰的问题。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 磁性纳米微球的制备与生物应用
• 1.1.1 磁性功能微球的定义与分类
• 1.1.2 磁性微球的生物学应用
• 1.2 磁性氧化硅微球制备及表面功能基团的修饰
• 1.3 固相载体表面氨基基团的定量检测方法
• 1.3.1 滴定法
• 1.3.2 显色法
• 1.3.3 荧光法
• 1.3.4 其他方法
• 1.4 本文的研究目标、意义和主要内容
• 1.4.1 本文的研究目标及意义
• 1.4.2 本文研究的主要内容
• 第二章 建立基于荧光胺的微球表面氨基检测方法
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验仪器
• 2.2.3 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 表面氨基定性研究
• 2.3.2 荧光光谱
• 2.3.3 缓冲溶液pH 值对氨基定量检测的影响
• 2.3.4 伯胺与荧光胺反应时间对氨基定量检测的影响
• 2.3.5 氨基定量检测标准曲线的建立
• 2.3.6 磁性微球对氨基定量检测的影响
• 2.3.7 氨基改性的氧化硅磁性微球表面氨基的定量检测
• 2.4 本章小结
• 第三章 建立基于ITL/BCA 的微球表面氨基检测方法
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验仪器
• 3.3 实验结果讨论
• 3.3.1 表面氨基定性研究
• 3.3.2 BCA 法定量检测半胱氨酸标准曲线
• 3.3.3 标准曲线与样品测试温度的改变对检测结果的影响
• 3.3.4 标准曲线和样品与BCA 工作液的反应时间对检测结果的影响
• 3.3.5 ITL 浓度改变对测试结果的影响
• 3.3.6 BCA 试剂与MicroBCA 试剂对检测结果的影响
• 3.3.7 干扰物质对检测值的影响
• 3.3.8 样品的测试
• 3.3.9 差减法
• 3.4 本章小结
• 第四章 全文总结与展望
• 4.1 本文总结
• 4.2 展望
• 参考文献
• 硕士研究生攻读期间发表的论文
• 致谢