论文摘要
目的:构建用于防治单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗并进行初步免疫学研究,探讨HSV-1 截短糖蛋白B 基因作为基因疫苗的可能性。方法:利用PCR 技术从HSV-1 SM44 株基因组中扩增出HSV-gB 的截短基因片断gBt（1482bp）,去掉了胞内区,跨膜区,信号肽中N 端39bp 和部分胞外区的基因序列,只包含部分信号肽序列和部分胞外区基因序列,将其定向插入真核表达质粒pcDNA3 载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA-gBt,并对其进行酶切分析、PCR 鉴定及测序鉴定;,用pcDNA-gBt 三次肌肉接种小鼠后,通过中和试验、ELISA 方法检测中和抗体滴度观察免疫效果,以单纯疱疹病毒攻击小鼠观察pcDNA-gBt 对小鼠的免疫保护作用。结果:双酶切重组质粒pcDNA-gBt,电泳可见两条带,分别为目的基因（1.5kb）和线性质粒pcDNA3（5.4kb）;以重组质粒pcDNA-gBt 为模板进行PCR 扩增,在1.5kb 位置扩增出特异的产物;测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与GeneBank 中登录的HSV-1F 株gB 基因序列比较,同源性达99.5%;实验小鼠产生了对HSV-1 特异性的抗体（抗体滴度:中和试验法1:61,ELISA 法1:406）,以HSV-1 对小鼠进行病毒攻击（存活率80%）。结论:成功地构建了重组真核表达质粒单纯疱疹病毒糖蛋白B 截短基因疫苗,用其免疫小鼠可以诱导产生特异性免疫反应,并具有免疫保护作用;为进一步构建病毒糖蛋白联合疫苗并最终用于单疱病毒角膜炎的预防和治疗奠定理论基础。
论文目录
相关论文文献
- [1].巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达[J]. 动物医学进展 2017(08)
- [2].BVDV-E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果评价[J]. 动物医学进展 2020(01)
- [3].猪细环病毒2型ORF1截短基因的原核表达[J]. 黑龙江畜牧兽医 2015(19)
- [4].Ⅰ型鸭肝炎病毒vp3基因的截短表达及鉴定[J]. 中国动物传染病学报 2012(03)
- [5].鸭圆环病毒基因组序列分析及其C1截短基因的原核表达[J]. 中国兽医学报 2009(10)
- [6].水貂阿留申病病毒VP2截短基因的原核表达[J]. 动物医学进展 2015(04)
- [7].应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果[J]. 中国兽医学报 2014(04)
- [8].PCV2ORF1、ORF2截短基因原核表达载体的构建及表达[J]. 家畜生态学报 2010(03)
- [9].鲤疱疹病毒2型ORF5截短基因的克隆表达及免疫原性研究[J]. 中国兽医科学 2016(11)
- [10].牛病毒性腹泻病毒E2截短基因重组卡介苗安全性和最佳免疫剂量的研究[J]. 动物医学进展 2014(07)
- [11].犬细小病毒VP2截短基因的原核表达及表达蛋白抗原性分析[J]. 中国兽医学报 2012(07)
- [12].HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗[J]. 基础医学与临床 2019(03)
- [13].猪Ⅱ型圆环病毒ORF2截短基因的表达纯化及动物免疫试验[J]. 中国兽医学报 2008(04)
- [14].约氏疟原虫SAP1重组DNA疫苗的构建及鉴定[J]. 中国病原生物学杂志 2016(11)
- [15].人巨细胞病毒UL32和UL44融合基因的表达及其抗原性分析[J]. 中国热带医学 2014(03)
- [16].小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备[J]. 现代免疫学 2011(04)
- [17].猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国动物传染病学报 2016(04)