人参皂甙联合细胞因子诱导白血病细胞向树突状细胞分化的实验研究

论文摘要

背景和目的:残留白血病细胞是白血病完全缓解后复发的最重要因素。白血病细胞来源的树突状细胞（dendritic cell,DC）具有抗原递呈功能,又携带白血病相关抗原,能激发机体免疫系统产生特异性细胞毒性T细胞,对白血病细胞进行杀伤。以白血病细胞来源DC为基础的免疫治疗为清除残留白血病细胞,从而提高白血病的治愈率提供了良好的前景。人参皂甙Rg3作为人参皂甙最重要作用单体,有广泛抗肿瘤、提高免疫作用,又能诱导肿瘤细胞分化。本研究应用人参皂甙Rg3联合细胞因子诱导DC,探讨白血病细胞来源DC的诱导条件及其抗白血病功能,并与正常人单个核细胞诱导的DC进行比较。为白血病细胞来源DC疫苗应用于临床发挥免疫治疗作用奠定基础。方法:选用K562白血病细胞株,患者白血病细胞及正常人单个核细胞,细胞因子（GM-CSF、IL-4、TNF-α）联合有诱导分化作用的人参皂甙Rg3诱导DC生成。诱导因子分组为:1.GM-CSF、IL-4、TNF-α、高浓度Rg3;2.GM-CSF、IL-4、TNF-α、低浓度Rg3;3.GM-CSF、IL-4、TNF-α;4.空白对照组。诱导第7天、14天以光镜和电子显微镜观察诱导细胞的形态特征,用流式细胞术（FCM）检测DC相关抗原（CD80、CD86、CD1a、HLA-DR、CD83）表达。MTT法检测DC激发同种混合淋巴细胞反应（MLR）和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）体外杀伤的能力,用ELISA方法检测IL-12分泌量。选两例慢性粒细胞白血病细胞诱导的DC,用荧光原位杂交（FISH）技术检测bcr/abl融合基因,证明所诱导DC依然携带白血病特异性异常基因。用免疫磁珠法纯化CD80+的白血病细胞来源DC（L-DC）,台盼蓝检测纯化DC活性。结果:1.各组细胞经人参皂甙Rg3联合细胞因子诱导均产生了不同比率的具有树突状细胞形态学特征的DC。这些细胞表达DC的表面分化抗原,且具有DC的功能,能刺激产生MLR和CTL反应。2.不同前体细胞诱导DC所需时间不同,正常人单核细胞所需时间短约10天左右;而原代白血病细胞及K562细胞株所需时间较长约13-14天左右。3.不同前体细胞诱导DC产率不同,以CD80、CD86双阳性定义DC,正常单核细胞产率较高,而原代白血病细胞较低分别为59.75%、20.51%。不同亚型原代白血病细胞诱导DC获得率不同,AML-M5型白血病细胞诱导获得率最高为26.95%,其他亚型急性白血病细胞诱导产率为13.9%。4.FISH检测原代慢性粒细胞白血病细胞来源DC（CML-DC）仍有bcr/abl融合基因,证实所诱导DC为白血病细胞来源。5.用免疫磁珠纯化L-DC后,CD80+DC纯度达到了93.1%,台盼蓝染色检测分选后DC活细胞数>90%。6.Rg3联合细胞因子对单核细胞有促进诱导分化作用,使单核细胞-DC（M-DC）获得率由43.31%提高到59.75%,并提高DC刺激淋巴细胞增殖能力。结论:1.利用人参皂甙Rg3联合细胞因子可以将正常人单核细胞、原代白血病细胞及K562细胞株体外诱导成为形态、表型和功能符合DC特征的细胞。联合人参皂甙Rg3可使DC产率增加,在单核细胞诱导中尤为明显。2.不同前体细胞诱导成为DC所需时间不同。正常人单核细胞所需时间短,而原代白血病细胞及K562细胞株所需时间较长。不同前体细胞诱导成为DC的产率明显不同。本研究中正常单核细胞诱导产率较高,原代白血病细胞诱导获得率较低。不同亚型原代白血病细胞诱导效果不同,以AML-M5型白血病细胞诱导DC产率为高。3.利用免疫磁珠技术可以获得高纯度的白血病细胞来源DC,达到了目前DC疫苗的质量控制标准[1]。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢