辽宁碱蓬中磷脂酰胆碱的分离纯化及体外抑癌活性研究

论文摘要

碱蓬是一种优质蔬菜、经济作物和具有医疗保健价值的植物资源,目前对碱蓬的开发利用度还比较低,发展前景广阔。本论文以辽宁碱蓬为材料,采用三氧化二铝柱层析法,优化流动相为95%乙醇:氨水（100:1,V/V）混合洗脱液,获得纯度高于93%、收率高于86%的磷脂酰胆碱（PC）。该方法与单一溶剂洗脱相比,增加了固定相对磷脂的选择性,而且在终产物中无毒性物质残留。碱蓬源磷脂酰胆碱与其他来源磷脂类产品相比,原料价格低廉、来源广泛,产品中无农药、激素、抗生素类残留等安全问题,原料污染少,无转基因食品隐患,更符合医用高纯PC的要求。使用纯化所得磷脂酰胆碱对7721、HepG2、MCF-7和Hela四种癌细胞进行体外增殖抑制实验,均表现出较强的抑癌活性,呈时间、剂量依赖方式。抑制作用具有一定的选择性,对肝癌细胞7721和HepG2的抑制率略高于其他两种细胞。制备品与Sigma标准品做平行对照实验,MTT法测定、改良寇氏法计算IC50,证实二者抑制效用相当。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 辽宁碱蓬
• 1.1.1 辽宁碱蓬的形态学特征
• 1.1.2 中国碱蓬资源状况
• 1.1.3 碱蓬的应用价值
• 1.1.3.1 碱蓬的营养成分及食用价值
• 1.1.3.2 碱蓬植物系列产品深加工
• 1.1.3.3 碱蓬在畜牧业的应用
• 1.1.3.4 碱蓬的医药价值
• 1.1.3.5 碱蓬的观赏价值
• 1.1.3.6 碱蓬与抗逆基因
• 1.1.4 开发碱蓬资源的意义
• 1.1.4.1 扩大土地资源
• 1.1.4.2 保护淡水资源
• 1.1.4.3 维护生态环境
• 1.1.5 碱蓬资源开发前景及方向
• 1.2 磷脂酰胆碱
• 1.2.1 磷脂酰胆碱的结构和性质
• 1.2.1.1 磷脂酰胆碱的结构
• 1.2.1.2 磷脂酰胆碱的理化性质
• 1.2.1.3 磷脂酰胆碱稳定性的影响因素
• 1.2.2 磷脂酰胆碱的生理活性
• 1.2.2.1 参与细胞膜组成
• 1.2.2.2 胆碱及必需脂肪酸供应源
• 1.2.2.3 乳化特性
• 1.2.2.4 免疫调节及抗肿瘤
• 1.2.3 磷脂酰胆碱的应用
• 1.2.4 国内外的开发现状
• 1.2.5 磷脂酰胆碱分离纯化方法
• 1.3 本研究目的及意义
• 第二章 辽宁碱蓬中磷脂酰胆碱的分离纯化
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料和试剂
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 方法
• 2.1.3.1 碱蓬水分含量测定
• 2.1.3.2 碱蓬粗磷脂浸提及吸附
• 2.1.3.3 三氧化二铝柱层析
• 2.1.3.4 丙酮沉淀法精制磷脂酰胆碱
• 2.1.3.5 磷脂酰胆碱的鉴定
• 2.1.3.6 磷脂酰胆碱的含量测定
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 碱蓬粗磷脂的提取
• 2.2.1.1 水分含量对Folch 法提取总脂的影响
• 2.2.1.2 氧化铝富集粗磷脂
• 2.2.2 柱层析法纯化磷脂酰胆碱
• 2.2.2.1 筛选流动相
• 2.2.2.2 洗脱监测
• 2.2.2.3 重复使用性考察
• 2.2.3 定性及定量检测
• 2.2.3.1 TLC 定性检测
• 2.2.3.2 HPLC 定量分析
• 2.2.3.3 纯度及收率
• 2.2.4 讨论
• 2.3 结论
• 第三章 磷脂酰胆碱对多种癌细胞体外生长的抑制作用
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 材料和试剂
• 3.1.1.2 动物瘤株
• 3.1.1.3 实验仪器
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 溶液配制
• 3.1.2.2 细胞培养
• 3.1.2.3 增溶剂及其用量的确定
• 3.1.2.4 MTT 比色法测定细胞生长抑制
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 增溶剂及用量的确定
• 3.2.2 磷脂酰胆碱对癌细胞体外生长抑制作用
• 3.2.3 制备品与标准品抑制效用比较
• 3.2.4 讨论
• 3.3 结论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附:作者简历及攻读硕士期间发表的论文