川芎内生菌与品质相关性研究

论文摘要

川芎为伞形科（Umbelliferae）植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎,是著名的川产道地药材,主产于四川,具有活血行气、祛风止痛功效。已有的研究表明:川芎挥发性类成分具有较强的生理活性,是川芎中的主要活性成分;不同产地和品种川芎的挥发油含量和组分存在差异,并认为川芎道地药材的成因主要与生态环境中特定的土壤与气候有关。鉴于宏观生态环境的尺度较大,难以解释不同微环境川芎存在品质差异。为此,我们开展了川芎内环境与川芎品质的相关性研究。首先,从不同产地和不同品种的川芎根茎共分离得到内生真菌87株,经形态观察鉴定为1纲、3目、4科、17属。在目的分类水平上以丛梗孢目（Moniliales）为优势种群,包含菌株占总菌株数的94.3%;在属的分类水平上以镰孢属（Fusarium）、曲霉属（Aspergillus）、头孢霉属（Cephalosporium）、拟小卵孢属（Ovulariopsis）为优势种群,包含菌株分别占总菌株数的30.0%、19.5%、14.9%、14.9%。首次揭示不同产地及不同品种川芎内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异;道地产区的内生真菌种群多样性较非道地产区更丰富;不同产地的内生真菌种群组成中有特有种群,聚类分析表明,四川道地产区都江堰石羊的内生真菌种群结构基本稳定。从川芎根茎中直接提取内生真菌DNA后,以特异性引物扩增真菌的18S rDNA区段,采用扩增核糖体DNA限制性酶切基因分析（ARDRA）:不同样品的ARDRA图谱有一定的差异,其中也存在共有的保守条带,体现出不同样品中有效扩增的内生真菌间的亲缘关系与遗传差异。DGGE分离内生真菌只能得到1～2个条带,证实DGGE对500 bp以上的片段检测有局限。其次,对川芎内生细菌的研究。对细菌16S rDNA区段扩增后,经DGGE分析,共检测37个条带,不同样品均得到了数量不等的条带,彼此并且存在特异条带和共同条带,说明不同产地和不同样品间既存在相似的微生物类群又具有其特异的微生物种群;显示出微生物种群的多样性。再其次,采用GC-MS对道地产区和非道地产区的川芎油挥发性成分进行了分析,共分离鉴定48个成分。6个样品共有成分7个,其中均以藁本内酯为主要成分,道地产区比非道地产区的含量,与文献报道的相符。主成分分析法（PAC）表明前5个主成分所包含21个化学成分的累积贡献为100%,足以概括挥发性成分的信息,聚类结果表明川芎油挥发性成分与产地有一定相关性。同时不同产地川芎油中含13.69%～38.38%不等的脂肪酸类成分。最后,用SPSS对内生真菌、内生细菌与挥发油中挥发性成分相关性分析表明:拟小孢卵属的存在与进藁本内酯的呈正相关,而青霉属、沃德属霉属的存在与藁本内酯呈负相关。2006年、2007年的石羊和敖平的内生真菌和川芎油的数据,表明拟小孢卵属的存在对藁本内酯的含量起促进作用。内生细菌与挥发性成分没有发现相关性,其种群结构仅与脂肪酸类成分具有相关性,表明内生细菌仅与植物初生代谢物的形成有关。通过这次研究为川芎道地性的形成提供了一条新解释。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 研究背景
• 1.2 研究的目和意义
• 1.3 研究目标
• 1.4 研究内容
• 1.5 研究技术路线图
• 2 川芎内生菌的种群结构分析
• 2.1 川芎内生真菌的纯培养研究
• 2.1.1 材料与方法
• 2.1.2 实验结果
• 2.1.3 小结与讨论
• 2.2 川芎内生真菌的ARDRA分析
• 2.2.1 材料与方法
• 2.2.3 实验结果
• 2.2.4 小结与讨论
• 2.3 川芎内生真菌的DGGE分析
• 2.3.1 材料与方法
• 2.3.2 实验结果
• 2.3.3 小结与讨论
• 2.4 川芎内生细菌的DGGE分析
• 2.4.1 材料与方法
• 2.4.2 实验结果
• 2.4.3 小结与讨论
• 3 川芎油挥发性成分分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 实验结果
• 3.2.1 川芎油的提取
• 3.2.2 川芎油挥发性成分分析
• 3.2.3 挥发性成分的主成分分析与聚类分析
• 3.3 小结与讨论
• 4 川芎内生真菌与挥发性成分相关性分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 实验结果
• 4.3 小结与讨论
• 5 总结与展望
• 文献综述
• 1 内生菌的生态功能
• 1.1 内生菌的生物多样性
• 1.2 内生真菌的生态功能
• 1.3 内生真菌对药用植物代谢产物的影响
• 2 内生真菌多样性研究的方法
• 2.1 形态学的研究方法
• 2.2 分子分类的研究方法
• 参考文献
• 致谢
• 公开发表的学术论文、专著及科研成果