论文摘要
缺血性脑血管病是常见的中枢神经系统疾病之一,具有很高的致死率和致残率。与心脏病、恶性肿瘤一起,构成了多数国家的三大致残疾病,严重威胁着人类的健康。如何改善缺血性脑损伤后脑血流、促进受损神经元的修复与再生,一直是人们研究的重点和难点,神经生长因子和血管生长因子更是倍受关注。目前研究较多的是胰岛素样生长因子-1（Insulin like growth factor-1,IGF-1）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）和碱性成纤维生长因子（Basic fibroblast growth factor, bFGF）等。随着研究的不断深入,外源性IGF-1已开始应用于缺血性脑血管病的实验研究,但脑缺血后IGF-1和VEGF、bFGF表达的关系,以及IGF-1发挥神经营养保护作用的确切机制,目前为止,尚不清楚。目的:通过线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞后局灶性脑缺血再灌注模型。经侧脑室注射胰岛素样生长因子（IGF-1）后,采用免疫组化和RT-PCR技术,观察IGF-1对大鼠脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）蛋白和基因表达的影响,初步探讨IGF-1对脑缺血损伤发挥神经保护作用的分子机制,为IGF-1进一步临床应用提供理论依据,为脑梗死的治疗提供新途径。方法:1、采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞后局灶性脑缺血再灌注模型。2、动物分组:取健康成年SD大鼠72只,体重250300g,雌雄不限,随机分为3组:（1）假手术组（n =24）;（2）脑缺血/再灌注组（n =24）; （3） IGF-1治疗组（n =24）。脑缺血/再灌注组、IGF-1治疗组再随机分为缺血2h再灌注12 h、1d、3d、7d四个亚组,每亚组6只。假手术组也按相同的时间点随机分为四个亚组,每亚组6只。IGF-1治疗组大鼠局灶性脑缺血/再灌注（MCAO）模型制备成功后,即刻在立体定向仪下向大鼠左侧脑室缓慢注射IGF-1 10μL,时间不少于10min;脑缺血/再灌注组用同样方法注射0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）10μL;假手术组仅作颈部皮肤切口和血管分离,不行MCAO,但行等量PBS注射。3、各组大鼠均在规定的时间内快速断头取脑。从额极到枕叶按A、B、C、D 4等份切脑,A脑片弃去,在规定的时间内剥取B、C脑片梗死灶周围的脑皮层组织各100mg,在1 %的DEPC水中稍作漂洗,立即放入冻存管中,液氮中保存。B脑片用于检测VEGF- mRNA含量、C脑片用于检测bFGF-mRNA含量,均采用RT-PCR方法。D脑片放入4%多聚甲醛中固定,24h后石蜡包埋,作5μm切片,用于HE染色和VEGF、bFGF的免疫组化染色。4、行为学评价:在缺血再灌注后12h、24h、3d、7d,由不了解实验分组的人员采用改良神经功能评分（Modified neurological severity score, mNSS）对动物进行行为学检查。改良神经功能评分从0到18分之间分级（正常为0分,最严重损伤18分）。1分代表不能完成一项任务或缺少一项测试反射,16分为轻度损害,712分为中度损害,1318分为重度损害。5、统计学分析:所测数据均用均数±标准差（ x±s）表示,多组间比较采用单因素方差分析, SNK-q检验;两组间比较采用t检验。以a=0.05作为显著性检验水准。结果:1、脑缺血/再灌注组和IGF-1治疗组大鼠术后出现左侧Horner’s征,右侧肢体瘫痪,以前肢为重,说明MCAO模型制备成功。假手术组仅出现左侧Horner’s征。2、假手术组大鼠均无神经功能缺损症状。大鼠缺血再灌注12h、24h、3d、7d行为学评分（mNSS）,IGF-1治疗组均显著低于缺血再灌注组(（P<0.05）。3、脑缺血/再灌注组半暗带皮质区VEGF蛋白阳性细胞数于脑缺血再灌注24h达高峰,3d降至较低水平,7d降至基线水平。IGF-1治疗组VEGF蛋白表达于缺血再灌注12h到7d较脑缺血/再灌注组显著增高,p<0.05。4、VEGF mRNA表达以12h表达最高,持续至24h很快降低,7d降至较低水平。IGF-1治疗组VEGF mRNA表达,在各时间点均高于脑缺血/再灌注组,p<0.05。5、脑缺血/再灌注组bFGF蛋白阳性细胞数于24h达高峰,然后逐渐降低,7d仍有少量表达;IGF-1治疗组各时间点bFGF蛋白表达均较脑缺血/再灌注组高,P<0.05。6、bFGF mRNA 12h表达水平最高,后逐渐降低,7d降到较低水平。IGF-1治疗组与脑缺血/再灌注组比较,各时间点bFGF mRNA表达均较同时间点高,P<0.05,有统计学意义。7、HE染色,光镜下观察,假手术组脑组织结构无明显异常。缺血再灌注24 h正常神经细胞数减少明显,神经元空泡变性多,可见细胞核固缩,组织疏松,细胞间隙增大。IGF-1治疗组脑组织损伤程度较轻,皮层神经元细胞空泡变性较少,间质水肿轻,正常细胞数增多。结论:1、本实验通过侧脑室注入外源性IGF-1,明显改善了大鼠脑缺血再灌注后的神经功能,证明IGF-1对缺血再灌注损伤有保护作用。2、脑缺血后可诱导VEGF、bFGF基因及蛋白表达增高,是自我保护机制的一种反应。3、IGF-1可以使脑缺血再灌注后脑组织中VEGF、bFGF的表达进一步增高。4、IGF-1对脑缺血的保护作用可能是通过增加脑组织中VEGF、bFGF基因及蛋白表达而实现的。5、本实验探讨了IGF-1对脑缺血的保护作用及可能机制,为临床应用IGF-1治疗脑缺血损伤提供了理论依据。
论文目录
相关论文文献
- [1].利肺片对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响[J]. 中成药 2020(02)
- [2].慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的建立与评价[J]. 中国实验动物学报 2020(02)
- [3].国内外大鼠和小鼠微生物、寄生虫检测标准的比较[J]. 实验动物与比较医学 2020(02)
- [4].武夷岩茶对酒精性肝损伤大鼠的护肝作用[J]. 武夷学院学报 2020(03)
- [5].参芎葡萄糖注射液对大鼠肺动脉高压的治疗作用及其机制[J]. 中国生物制品学杂志 2020(06)
- [6].口服蛋氨酸饲料致大鼠心室重塑的研究[J]. 天津医科大学学报 2020(03)
- [7].腹部推拿对结肠慢传输型便秘大鼠的治疗效果[J]. 新疆医科大学学报 2020(04)
- [8].基于UHPLC-Q-Exactive MS分析鉴定隐丹参酮在大鼠体内的代谢产物[J]. 质谱学报 2020(04)
- [9].针刺对慢性温和刺激大鼠粪便代谢的影响[J]. 针灸临床杂志 2020(07)
- [10].两种不同方法制造简易大鼠挤压伤模型的研究[J]. 宁夏医科大学学报 2020(08)
- [11].酸枣仁水提物对焦虑大鼠症状的改善及其对肠道菌群的影响[J]. 现代食品科技 2019(11)
- [12].早期肠内营养对重症肺炎大鼠免疫功能的影响分析[J]. 中国医学前沿杂志(电子版) 2017(01)
- [13].右美托咪定后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 临床医学工程 2017(02)
- [14].滨蒿内酯对大鼠实验性变应性鼻炎的疗效及机制[J]. 贵州医科大学学报 2017(01)
- [15].黄连解毒汤对营养性肥胖大鼠的毒性研究[J]. 光明中医 2017(10)
- [16].三七总皂甙对骨折大鼠血管内皮生长因子基因扩增及蛋白表达水平影响的研究[J]. 临床医药文献电子杂志 2017(51)
- [17].小花棘豆中毒对大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴α-甘露糖苷酶的影响[J]. 福建农林大学学报(自然科学版) 2016(01)
- [18].法舒地尔对百草枯致大鼠肺纤维化的干预作用[J]. 浙江实用医学 2016(01)
- [19].富血小板血浆对创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的保护作用[J]. 吉林大学学报(医学版) 2016(05)
- [20].白虎汤对全身炎症反应综合征大鼠炎症因子的影响[J]. 四川中医 2015(01)
- [21].长期饮用淡化海水对大鼠血脂影响[J]. 中国公共卫生 2015(07)
- [22].辛伐他汀预处理对大鼠神经源性肺水肿的作用及其机制[J]. 中国动脉硬化杂志 2015(10)
- [23].猫捉大鼠[J]. 中小学音乐教育 2020(07)
- [24].西维来司钠对大鼠脑出血保护作用机制的实验研究[J]. 现代养生 2017(10)
- [25].药对藿香-陈皮配伍前后对功能性消化不良大鼠的初步药效学研究[J]. 健康之路 2017(07)
- [26].VND3207药物对中子辐照大鼠脏器指数的影响[J]. 中国原子能科学研究院年报 2016(00)
- [27].韭菜洋葱有助睡眠[J]. 益寿宝典 2017(14)
- [28].毒瘾也“世袭”?雄性大鼠毒瘾遗传给后代[J]. 创新时代 2017(08)
- [29].脉冲射频治疗对带状疱疹后神经痛模型大鼠脊髓背角自噬的影响[J]. 临床麻醉学杂志 2019(12)
- [30].麝香保心丸对高尿酸血症大鼠内皮功能的影响[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2019(23)
标签：缺血再灌注论文; 胰岛素样生长因子论文; 血管内皮生长因子论文; 碱性成纤维生长因子论文; 基因表达论文;