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7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷介导的CD36受体信号通路研究

2020-12-08阅读(412)

7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷介导的CD36受体信号通路研究

论文摘要

氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,oxLDL）被认为是诱导动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）发生的主要危险因子。巨噬细胞清道夫受体CD36因其可识别并大量摄取oxLDL而成为动脉粥样硬化研究中的重要靶点。CD36主要通过脂质配体促进oxLDL的识别摄取。本课题组前期研究发现的一种新型oxLDL单一脂质化合物7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷（7-ketocholesteryl-9-carboxynonanoate,oxLig-1）因具有与CD36低亲和力配体完全一致的化学结构,为oxLig-1诱导的J774A.1小鼠巨噬细胞CD36受体信号通路研究提供了理论依据。由此展开oxLig-1在动脉粥样硬化发生发展中介导的巨噬细胞清道夫受体CD36信号通路和细胞应答研究。免疫沉淀和免疫印迹结果表明:oxLig-1介导活化了J774A.1小鼠巨噬细胞表面清道夫受体CD36并招募蛋白激酶分子Fyn,Lyn,Caveolin-1发生酪氨酸磷酸化,进而活化MAP蛋白激酶ERK1/2和JNK1/2,且src-激酶抑制剂AG1879可显著抑制ERK1/2和JNK1/2的磷酸化水平。结合基因芯片数据发现:oxLig-1显著上调了J774A.1小鼠巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ATP binding cassette transporter A1,ABCA1）mRNA和总蛋白水平,且JNK1/2抑制剂SP600125可显著抑制此上调作用,但ERK1/2抑制剂无此作用。CD36 mRNA和总蛋白表达则未受oxLig-1作用的影响。MTT和油红染色实验结果说明:oxLig-1显著促进J774A.1小鼠巨噬细胞增殖,且src-激酶抑制剂AG1879可显著抑制此细胞增殖作用。但oxLig-1未导致形成泡沫化细胞模型。上述结果显示:oxLig-1可通过Fyn,Lyn,Caveolin-1,JNK1/2活化CD36受体调节的信号通路,最终导致ABCA1 mRNA和总蛋白表达上调并促进J774A.1细胞增殖。oxLig-1未影响CD36但促进ABCA1 mRNA和总蛋白的表达揭示出其在动脉粥样硬化疾病预防和治疗中的潜在功效。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 引言
  • 1 文献综述
  • 1.1 动脉粥样硬化研究现状
  • 1.1.1 炎症与动脉粥样硬化
  • 1.1.2 抗炎症药物及调节与动脉粥样硬化
  • 1.2 清道夫受体CD36 研究现状
  • 1.2.1 CD36 结构
  • 1.2.2 CD36 配体及细胞表达类型
  • 1.2.3 CD36 受体作用机理
  • 1.2.4 oxLDL 诱导的CD36 信号通路
  • 1.2.4 β-淀粉样蛋白诱导的CD36 信号通路
  • 1.2.5 CD36 基因表达调节物
  • 1.3 ABCA1 研究现状
  • 1.3.1 ABCA1 结构和功能
  • 1.3.2 ABCA1 的表达调节
  • 1.4 MAPK 研究现状
  • 1.4.1 MAPK 的组成
  • 1.4.2 MAPK 在动脉粥样硬化形成中的作用
  • 1.5 oxLig-1 研究现状
  • 1.5.1 oxLig-1 的发现
  • 1.5.2 oxLig-1 的由来
  • 1.6 结束语
  • 2 oxLig-1 的化学合成与结构比较
  • 2.1 引言
  • 2.2 仪器与试剂
  • 2.2.1 实验仪器
  • 2.2.2 试剂
  • 2.3 实验方法
  • 2.3.1 oxLig-1 的合成
  • 2.4 结果与讨论
  • 2.4.1 oxLig-1 的合成及结构确定
  • 2.4.2 oxLig-1 与CD36 配体结构比较
  • 2.5 小结
  • 3 oxLig-1 活化小鼠巨噬细胞J774A.1 受体CD36 信号通路
  • 3.1 引言
  • 3.2 仪器和试剂
  • 3.2.1 实验仪器
  • 3.2.2 试剂与配制
  • 3.3 实验方法
  • 3.3.1 细胞培养
  • 3.3.2 蛋白质提取
  • 3.3.3 免疫沉淀（Immunoprecipitation）
  • 3.3.4 免疫印迹（Western blot）
  • 3.3.5 统计学方法
  • 3.4 结果与讨论
  • 3.4.1 oxLig-1 作用J774A.1 细胞后活化CD36 受体蛋白
  • 3.4.2 oxLig-1 作用J774A.1 细胞后CD36 受体招募蛋白分子的确定
  • 3.4.3 oxLig-1 作用J774A.1 细胞后活化下游ERK1/2 和JNK1/2 信号通路
  • 3.4.5 oxLig-1 活化src-激酶调节的下游ERK1/2 和JNK1/2 信号通路
  • 3.5 小结
  • 4 oxLig-1 刺激下小鼠巨噬细胞J774A.1 的应答效应
  • 4.1 引言
  • 4.2 仪器和试剂
  • 4.2.1 实验仪器
  • 4.2.2 试剂与配制
  • 4.3 实验方法
  • 4.3.1 总RNA 提取，浓度测定及电泳检测
  • 4.3.2 RT-PCR
  • 4.3.3 油红O 染色
  • 4.3.4 MTT 法
  • 4.3.5 动脉粥样硬化实时定量PCR 阵列实验
  • 4.4 结果与讨论
  • 4.4.1 oxLig-1 作用J774A.1 细胞受体CD36 蛋白质的表达变化
  • 4.4.2 oxLig-1 作用J774A.1 细胞受体CD36 mRNA 水平变化
  • 4.4.3 oxLig-1 作用J774A.1 细胞ABCA1 蛋白质表达变化及调节因素确定
  • 4.4.4 oxLig-1 作用J774A.1 细胞ABCA1 mRNA 变化及调节因素确定
  • 4.4.5 oxLig-1 对J774A.1 细胞增殖作用及调节因素确定
  • 4.4.6 oxLig-1 对J774A.1 细胞泡沫化形成的影响
  • 4.5 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录A 缩略语表
  • 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
  • 致谢

    • 相关论文文献

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