论文摘要
鸡马立克氏病是鸡的一种由马立克氏病毒引起的以淋巴组织增生为特点的肿瘤性疾病。此病是世界上第一个能用疫苗预防的肿瘤病,长期以来人们一直对病原,组织病理学和早期分子生物学诊断进行深入的研究。尽管马立克氏病长期以来是科研工作的热点,但马立克肿瘤的发生机理尚未阐明。人类大量研究表明,遗传性非息肉性结直肠癌、大肠癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆管癌等的发生均与错配修复基因有关。普遍认为,错配修复系统功能的降低或缺失与癌前微卫星不稳定性及癌症的发生有关。本试验初步探索鸡发生马立克肿瘤后错配修复基因PMS1在DNA及mRNA水平上的变化情况,旨在发现发病后PMS1是否出现微卫星不稳定性以及表达异常。试验一,利用软件SSRHunter寻找PMS1中的微卫星位点,设计引物扩增微卫星位点的核心序列及侧翼序列。提取22只马立克发病鸡的正常及肿瘤组织的DNA,利用设计的引物扩增目的片段,经12%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染,凝胶成像系统拍照后分析微卫星位点的条带变化。选取变化明显的样本测序分析碱基序列变化。结果：在PMS1内含子区域,发现了一段(GT),,的片段,分别在其上游和下游侧翼序列区域设计引物,得到一段203bp的微卫星位点。在选取的22只MD发病鸡中,有16只鸡的肿瘤组织较正常组织表现出不同的MSI变化,MSI阳性率为72.8%,片段长度有增加也有减小。其中一只鸡测序结果发现核心序列发生变化,侧翼序列亦有碱基插入。试验二,设计荧光定量PCR引物,提取健康鸡的心、肝、脾、肺、肾、血液、肌肉、法氏囊、骨髓组织及发病鸡的肿瘤组织mRNA,分析PMS1在21日龄雏鸡各种健康组织转录水平的差异及肿瘤组织较正常组织表达量的变化。PMS1mRNA在各组织的定量结果显示：在分析的各组织中,mRNA在肌肉中表达最多,法氏囊和骨髓次之,在肺中表达最少。肌肉与心、脾的差异显著(P<0.05),与肺,血液的差异极显著(P<0.01)。肝与其他各组织无明显差异。马立克肿瘤发生后,PMS1在心、肝、脾、肺、肾中的表达量增加几十至几百倍不等。本试验发现在马立克发病后,鸡错配修复基因PMS1发生了变化,其它的错配修复基因还待进一步研究。本试验进一步丰富了鸡染色体微卫星位点的多样性,这是第一个在鸡错配修复基因中发现的微卫星位点,对我们检测PMS1的微卫星不稳定性及PMS1的变化有很大帮助。