天山雪莲指纹图谱及总黄酮提取物研究

论文摘要

目的:①建立天山雪莲药材的高效液相指纹图谱,为该药材的质量控制提供依据。②对天山雪莲总黄酮提取物进行初步质量研究、稳定性研究及药效学研究,为该提取物的进一步开发利用提供依据。方法:①收集不同产地的天山雪莲药材,采用梯度洗脱法建立HPLC指纹图谱,应用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004版）软件对指纹图谱进行分析评价。②采用比色法对天山雪莲总黄酮提取物中的总黄酮含量进行测定。③采用高效液相色谱法对天山雪莲总黄酮提取物中的芦丁和紫丁香苷同时进行测定。④采用影响因素试验考察温度、湿度、光线对天山雪莲总黄酮提取物的影响。⑤采用二甲苯致小鼠耳肿胀、冰醋酸致小鼠扭体、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀、Freund’s完全佐剂致大鼠原发性、继发性关节炎损害和棉球肉芽肿等模型对照观察天山雪莲总黄酮提取物的抗炎、镇痛等作用,采用MTT法测定对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响。结果:①建立了天山雪莲药材的HPLC指纹图谱,对图谱进行比对发现虽产自不同地区,但图谱相似度差别不显著。②用比色法测定天山雪莲提取物中总黄酮含量,方法学考察表明本法符合测定要求,其中标准曲线方程为:y=0.5251x-0.0223（r=0.9996）,芦丁在0.2-1.2mg范围内线性关系良好;精密度试验RSD为0.46%;稳定性试验RSD为1.01%,表明供试品溶液放置5天对测定结果无影响;重复性试验RSD为0.70%;加样回收率试验平均回收率102.32%,RSD为0.96%;3批样品中总黄酮含量分别为44.39%、42.64%、43.14%。③用高效液相色谱法同时测定天山雪莲总黄酮提取物中的芦丁和紫丁香苷,方法学考察表明本法符合测定要求,其中紫丁香苷标准曲线方程为:A = 25842626.81C - 939.15,r=0.9999,表明在0.00276～0.02208mg/ml范围内,紫丁香苷峰面积与浓度具有良好的线性关系;芦丁标准曲线方程为:A = 17863886.50C– 28941.33,r=0.9996,表明在0.02～0.16mg/ml范围内,芦丁峰面积与浓度具有良好的线性关系;精密度试验紫丁香苷和芦丁的RSD分别为0.97%和0.90%;重复性试验紫丁香苷和芦丁的RSD分别为1.16%和1.13%;稳定性试验紫丁香苷和芦丁的RSD分别为1.78%和1.89%;加样回收率试验紫丁香苷平均回收率为102.56%,RSD为1.40%;芦丁平均回收率为101.85%,RSD为1.89%;3批样品中紫丁香苷含量分别为0.88%、0.85%、0.97%;芦丁含量分别为7.22%、6.34%、6.82%。④影响因素试验结果表明,温度（60℃）、光照（4500lx）对天山雪莲提取物的外观性状无影响,但相对湿度（RH75%）可引起其吸潮结块;温度（60℃）对天山雪莲提取物中总黄酮、紫丁香苷和芦丁的含量均无影响;相对湿度（RH75%）和光照（4500lx）对天山雪莲提取物中紫丁香苷含量无影响,但可使其中总黄酮和芦丁的含量略有降低;提示该提取物应储存于干燥避光环境。⑤药效试验结果表明,天山雪莲总黄酮提取物对佐剂性关节炎原发性和继发性损害均有保护作用,并能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀,明显减少冰醋酸致小鼠扭体反应次数,能减轻角叉菜胶致大鼠足肿胀度,明显抑制大鼠棉球肉芽肿,从抑制率来看,天山雪莲总黄酮提取物大剂量作用均优于阳性对照药野木瓜片;天山雪莲总黄酮提取物在浓度0.13-4mg/ml范围内对T、B淋巴细胞的增殖均有明显抑制作用,在浓度<0.06mg/ml时抑制作用均明显减弱;说明天山雪莲总黄酮提取物有良好的抗炎镇痛和调节机体免疫功能的作用。结论:①建立天山雪莲药材的指纹图谱,为综合评价天山雪莲药材的内在质量提供了依据。②天山雪莲总黄酮提取物具有良好的抗炎镇痛和调节机体免疫功能的作用,质量稳定可控,为进一步开发利用提供了基础数据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 天山雪莲指纹图谱研究
• 2 天山雪莲总黄酮提取物研究
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 个人简历
• 导师评阅表