论文摘要
目的构建jurkatT淋巴细胞与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocyte,RAFS）共培养体系,通过观察核心肽（core peptide,CP）对该体系中两种细胞的增殖、凋亡及相关炎性细胞因子表达的影响,探讨CP对RAFS的作用及其机制,为其进一步的临床应用奠定一定的理论基础。方法1.酶消化法进行RAFS分离培养,电镜及免疫组织化学方法进行鉴定,并观察其生长状态及增殖特性。2Jurkat T淋巴细胞的培养,观察其生长状态及增殖特性。3.MTT法观察不同浓度CP对Jurkat T细胞增殖的影响,流式细胞仪检测CP对Jurkat T细胞凋亡的影响,Real-Time PCR法观察CP对Jurkat T细胞炎性相关因子表达的影响。4.MTT法观察不同浓度CP对共培养体系中Jurkat T细胞及RAFS增殖的影响,流式细胞仪检测CP对共培养体系中Jurkat T细胞及RAFS凋亡的影响,Real-Time PCR法观察CP对共培养体系中Jurkat T细胞及RAFS炎性相关因子表达的影响。结果1.分离培养得到的RAFS经电镜及免疫组化鉴定以成纤维样滑膜细胞为主,其在体外培养扩增能力较强。2JurkatT细胞在培养液中悬浮,圆润透亮,随着培养时间的延长,细胞聚集成团生长,细胞体外扩增速度较快,增殖能力强。3.CP作用于Jurkat T细胞后,第7天高剂量即开始对其体外扩增出现明显抑制作用,中、低剂量分别在第10天、第13天开始表现抑制作用,至第13天三种剂量CP对T细胞的增殖均呈现出抑制作用,且具有剂量依赖性。4.相对于对照组CP能引起Jurkat T细胞的凋亡增加。作用24h时,中、高剂量CP相对于对照组引起明显的凋亡增加,而低剂量CP则凋亡增加不明显,作用48h时,仅高剂量CP相对于对照组凋亡明显增加。5.三种剂量CP均抑制了Jurkat T细胞的IL-2mRNA、TNFmRNA的表达,高剂量CP抑制了IL-23p19mRNA的表达。6.CP作用于混合培养体系后,从第4天开始,高剂量的CP对T淋巴细胞的增殖表现出抑制作用,并一直持续至第13天,中、低剂量在第13天开始表现持抑制作用。高剂量CP在第7天、第10天表现出对RAFS的抑制作用,中、低剂量对RAFS的增殖没有明显的抑制作用。7.三种浓度CP与空白对照组相比,在24h和48h均能引起共培养体系中JurkatT细胞的凋亡增加。作用24h时,与空白对照组相比,中、高剂量CP能引起共培养体系中RAFS的凋亡增加,作用48h时,只有高剂量CP能引起共培养体系中RAFS的凋亡增加。8.CP抑制混合培养体系中的Jurkat T的IL-2mRNA及相关炎性因子IL-23p19mRNA、TNFmRNA的表达,高浓度的CP抑制共培养中RAFS的IL23pl9mRNA的表达,中、高浓度CP抑制共培养中RAFS的TNFmRNA的表达。结论CP能抑制单纯培养及与RAFS混合培养的Jurkat T淋巴细胞的增殖、凋亡IL-2mRNA及相关炎性细胞因子IL-23p19mRNA、TNFmRNA的表达。高剂量的CP能抑制与Jurkat T淋巴细胞混合培养的RAFS的增殖、凋亡及相关炎性细胞因子IL-23p19mRNA、TNFmRNA的表达。
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