大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因型鉴定及药敏预测

论文摘要

目的:超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectrumβ-Lactamases, ESBLs）是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素的β-内酰胺酶,导致对多种抗生素的耐药性,感染者病死率极高,而且产超广谱β-内酰胺酶细菌很容易传递扩散,导致对抗生素耐药细菌的广泛传播,危害极大。因此快速检测产ESBLs细菌及其型别,及早预测出其药敏结果并指导临床用药具有重要意义。本研究以产超广谱β-内酰胺酶ESBLs大肠埃希菌为目标,采用毛细管电泳法（CE）,对相应临床分离株耐药酶基因型别进行鉴定。结果证实该法与传统平板凝胶电泳相比,具有分离速度快,分辨率高等优势,可以借此技术快速鉴定产ESBLs大肠埃希菌ESBLs基因型别。耐药菌分离出的主要目的通过药敏试验指导临床抗感染治疗。现行的美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的药敏试验提供抗生素的敏感性结果,需要进行至少18小时以上的培养过程,不利于抗感染治疗的早期诊断。由于气相色谱（GC）具有很强的多组分分离能力,质谱（MS）具有较强的定性特点,气相色谱质谱联用技术具有两者结合优势是比较显著的,可以检测代谢产物中的复杂组分。因此本研究拟运用气相色谱质谱联用技术（GC-MS）,定性定量分析细菌在低剂量头孢他啶刺激下细胞内代谢产物的变化,达到快速预测产ESBLs大肠埃希菌药敏结果的目的。方法:收集2005年11月-2006年2月大连市中心医院临床分离鉴定的120株产ESBLs大肠埃希菌,应用whonet软件分析总体药敏情况,提取大肠埃希菌细菌质粒后,以常用ESBLs耐药基因六对引物（TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ）做聚合酶链式反应（PCR）、扩增产物用毛细管电泳法做基因型别分析。大肠埃希菌培养过程中加低剂量抗菌药物头孢他啶,运用GC-MS方法,测定细菌胞内代谢产物的含量,采用聚类分析,判断细菌药敏情况。结果:大连市中心医院对ESBLs大肠埃希菌最敏感的药物是亚胺培南和美罗培南,敏感率为100%,相对较敏感的抗生素有头霉烯类的头孢西丁,加酶抑制剂的哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦,氨基糖苷类的阿米卡星。40株产ESBLs的大肠埃希菌中单基因型的分别为7株CTX-M-Ⅰ型占整体的17.5%,7株CTX-M-Ⅱ型占整体的17.5%,2株CTX-M-Ⅲ型占整体的5%,4株CTX-M-Ⅳ型占整体的10%,1株SHV型占整体的2.5%,1株TEM型占整体的2.5%。18株多基因型有占整体的46.15%,多数是CTX-M型与SHV型或TEM型共同存在的形式;除此之外,有一株扩增产物为阴性结果。所有菌株的细胞内化合物分析可发现至少1500个化合物离子碎片信息,经聚类分析,57株耐药菌中,有5株被误判;47株中敏菌中有8株被误判;16株敏感菌中有2株被误判。总体来说,本研究采用的方法GC-MS方法基本可以将敏感、耐药和中敏的菌株区分开来。结论:本文建立的毛细管电泳法可以较快速的鉴别产ESBLs大肠埃希菌的基因型别,通过GC-MS方法对细菌胞内代谢产物的含量的分析可以达到快速鉴定细菌药敏情况的目的,为临床快速药敏预测提供了一种崭新的方法。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢