食管癌组织中神经纤维分布的形态学研究及SP/NK1-R信号对Eca9706细胞的促生长作用

论文摘要

目的:探讨食管鳞癌组织中神经纤维的分布情况和P物质及其受体NK1-R拮抗剂L733060对食管鳞癌细胞的抑制作用。方法:应用免疫组化ABC法,检测手术切除的食管鳞癌组织内S100、GAP-43、PGP9.5、CGRP、SP、ERK1/2阳性神经纤维的分布情况,并分析其与患者临床病理参数的关系;免疫荧光双标法检测食管鳞癌组织中GAP-43和SP免疫阳性神经纤维;免疫组化、Western Blot、real time RT-PCR检测食管鳞癌组织和细胞系Eca9706中SP受体NK1-R的表达情况及ERK1/2、Bax/Bcl-2的蛋白表达变化;MTT法检测癌细胞增殖;流式细胞仪检测癌细胞凋亡;应用统计学软件SPSS16.0进行统计学分析。结果:相对于正常组织,食管鳞癌组织中存在相当数量的S100及GAP-43阳性神经纤维（束）不规则地分布于肿瘤细胞之间,且S100阳性纤维密度大于GAP-43阳性纤维密度,统计分析显示肿瘤组织中GAP-43阳性再生神经纤维密度与患者的肿瘤大小、淋巴结转移相关（P<0.05）。荧光双标结果显示癌组织中的神经纤维分布主要有三种类型:GAP-43阳性而SP阴性（48%）,代表再生的神经纤维但不能分泌SP;GAP-43阴性而SP阳性（28%）,代表SP能神经纤维,有可能是癌组织包裹原来就存在的神经纤维;GAP-43和SP双阳性（24%）,代表再生的且能分泌SP的神经纤维。食管鳞癌组织和细胞系均表达SP受体NK1-R,纳摩尔每升浓度的P物质可以显著提高Eca9706细胞的增殖能力,伴随NK1-R及pERK1/2表达增高;NK1-R拮抗剂L733060可以诱导细胞凋亡,具有体外抑瘤作用,表现为pERK1/2表达明显降低、Bax/Bcl-2比例增高。结论:食管鳞癌组织中存在再生神经纤维分布,其中部分为SP能神经纤维;食管鳞癌组织和细胞NK1-R表达升高,NK1-R拮抗剂L733060能够通过诱导凋亡起到抑制肿瘤生长的作用。SP/NK1-R信号可作为潜在的食管鳞癌治疗靶点。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 第一部分 正常食管的神经支配和神经纤维 损伤修复
• 第二部分 肿瘤神经支配的发现和研究进展
• 实验一 GAP-43 阳性神经纤维分布的免疫组化研究
• 1 材料和试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 癌组织内神经纤维的性质鉴定
• 1 材料和试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验三 SP 及其受体NK1-R 在食管癌中的表达和作用
• 1 材料和试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢