生物标志物的高灵敏检测新方法研究

论文摘要

在临床检验中，生物标志物的检测日益受到检验医师和研究者的关注，成为近年来研究的热点。本课题建立了测定肿瘤标志物神经元特异性烯醇化酶（NSE）全新的免疫学检测新方法和乙醇代谢产物乙基葡萄糖醛酸苷的气相色谱-质谱检测新技术。主要研究内容可分为以下两部分：1．基于功能化单壁碳纳米管和金纳米探针的免疫传感器检测血清中神经元特异性烯醇化酶本研究设计了一种基于NSE功能化单壁碳纳米管的电化学免疫传感器用来检测小细胞肺癌标志物神经元特异性烯醇化酶。功能化的单壁碳纳米管不仅增加了电极表面的信号传递，同时也提供了大的比表面积，提供了使更多量的抗原固定位点以便免疫反应中抗体的识别。加入了金纳米粒子标记的碱性磷酸酶标二抗探针（AP-anti-IgG/AuNPs），探针中的碱性磷酸酶催化底物产生还原反应，明显的放大了电化学信号。基于单壁碳纳米管和金纳米探针的双信号放大作用，该传感器的最低检出限为0.033ng/mL，线性范围在0.1-2μg/mL之间，具有良好的精密度和回收率，可直接定量检测复杂血清中的靶蛋白。所构建的传感器突破了片面追求超高的灵敏度的检测方法，在保持高灵敏的同时也增大了检测的线性范围，可对临床样本中高浓度的标志物进行直接检测。为了验证方法的实用性，将此方法的检测结果与临床实验室常用的化学发光法比较发现这两种方法有很好的相关性和重复性，这充分说明该方法在临床应用中有一定的潜力。2．生物检材中乙醇代谢产物乙基葡萄糖醛酸苷的气相色谱质谱检测在临床检验诊断和法医鉴定中判断近期酒精的摄入情况主要是通过测定患者血液、尿液或呼气中乙醇的浓度，但这种方法并不够准确，也存在着巨大的弊端，主要原因是乙醇在体内代谢较快（0.1g/kg/h），尤其是长期大量饮酒的患者代谢速率更快，饮酒后数小时血液中的乙醇便不能再被检出，因此无法准确判断乙醇的饮用情况。EtG是乙醇非氧化代谢途径的直接代谢产物，是乙醇在尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶的作用下与体内具有活性的葡萄糖结合而生成的。乙醇在体内消除后8小时EtG仍然可以在血液中检测到，消除后3-5天仍然可以在尿液中检测到，因此EtG可以作为一个乙醇代谢的直接标志物用于法医鉴定中判断酒后驾驶和临床检验中诊断慢性酒精性疾病。高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS）是目前检测的EtG一种方法，本研究将气相色谱质谱技术与固相萃取技术相结合，创建了一种更为简单、实用、廉价、高灵敏的气相色谱-质谱检测体液中乙基葡萄糖醛酸苷的新方法，该方法在100-3200ng/mL范围内呈良好的线性关系，相关系数为0.9921，具有较高的灵敏度和精密度，最低检出限为28.4ng/ml，日内和日间标准偏差均小于5%，能够满足临床检验和法医鉴定的需要。该方法对于临床检验中乙醇相关代谢疾病的诊断和法医鉴定中判断酒后驾驶有重要意义。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 基于功能化单壁碳纳米管和金纳米探针的免疫传感器检测血清中神经元特异性烯醇化酶
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂
• 2.2 仪器设备
• 2.3 金纳米粒子和金纳米探针制备
• 2.4 免疫传感器制备
• 2.5 电化学检测
• 3 结果与讨论
• 3.1 修饰电极的表征
• 3.2 金纳米探针的表征
• 3.3 条件优化
• 3.4 靶蛋白定量检测
• 3.5 实际样本检测和方法学比较
• 4 小结
• 参考文献
• 第二章 生物检材中乙醇代谢产物乙基葡萄糖醛酸苷的气相色谱质谱检测
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂
• 2.2 仪器设备
• 2.3 标准工作液配制
• 2.4 样本预处理
• 2.5 气相色谱质谱仪检测
• 3 结果与讨论
• 3.1 条件优化
• 3.2 色谱峰和质谱图的确认
• 3.3 方法学评价
• 3.4 实际样本的检测
• 4 小结
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述 肿瘤标志物的超灵敏电化学传感器检测
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表和待发的论文
• 会议论文
• 参加科研课题
• 获得奖励