砂海星主要活性物质的制备及酸性粘多糖的活性研究

论文摘要

砂海星（Luidia quinaria Von Martens）,属棘皮动物门（Echinodermata）海星纲（Asteroidea）,约占山东沿海海星资源总数的24%,主要分布在渤海中部和烟威渔场近海岸水域等盐度较高的海域。本文通过对砂海星酸性粘多糖及其它活性成分的制备和活性研究,可以为今后开发利用此类生物资源打下前期的基础,为砂海星资源的开发利用提供依据。（1）酸性粘多糖的制备:利用碱提法从黄海产砂海星中提取酸性粘多糖,粗品中糖和蛋白含量分别为29.5%和65.7%;Sevag法脱蛋白后,糖含量57.1%,蛋白含量13.8%;二次酶解后,糖和蛋白含量分别为63.2%和7.0%;提取物中含有硫酸基:25%的组分用离子交换层析（DE-52）和葡聚糖凝胶（G-75）进行分离、纯化,至少含有三个组分;用葡聚糖凝胶（G-100）对其分子量进行测定,其平均分子量约为12kD;琼脂糖凝胶电泳结果表明,该糖带负电。（2）多不饱和脂肪酸的提取:采用溶剂萃取和硅胶柱层析相结合的方法,从砂海星中提取脂肪并精制,其产率为1.18%。将精制脂肪进行气相色谱分析,结果表明,砂海星中含有丰富的不饱和脂肪酸,其种类共计约有24种,其中,二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）含量丰富。利用硅胶柱层析可以实现EPA和DHA的富集。经硅胶柱后,石油醚部分多不饱和脂肪酸的含量为57.564%,其中,EPA和DHA分别为46.015%和3.934%;乙酸乙酯部分多不饱和脂肪酸含量为54.948%,其中EPA和DHA分别为42.718%和3.705%。（3）分离纯化砂海星皂苷单体:采用85%乙醇水溶液反复提取的经典提取法,经石油醚脱脂、水饱和正丁醇萃取、丙酮沉淀从黄海产砂海星中制取海星总皂苷,总皂苷经大孔吸附树脂层析,葡聚糖凝胶LH-20层析等方法分离纯化得到海星皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,再经反复葡聚糖凝胶柱层析得到精制海星皂苷Ⅰ1、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅲ1、Ⅲ2、Ⅲ3,高效液相色谱法鉴定精制结果峰Ⅰ1、峰Ⅱ2呈现单峰。经泡沫实验,颜色反应实验,沉淀反应实验表明提取物为甾体皂苷。（4）酸性粘多糖的活性实验:以昆明种小鼠为实验动物,研究了砂海星氨基多糖（GAG）降血脂作用.结果表明,GAG能显著降低高脂饮食小鼠的TG,TC,LDL-C,并能显著提高LDL水平,能有效抑制高脂饮食小鼠血脂的升高,将血脂的各项指标控制在正常范围内:利用实验中制备的酸性粘多糖粗制品采用MTT法进行体外抗肿瘤实验,结果表明1.0mg/ml实验组具有显著的抗肿瘤活性,24h内对HL-60细胞的抑制率达58.2%.总之,研究表明砂海星作为海洋生物中一个小的类群,含有丰富的营养成分和多种活性物质,具有一定的保健和药用价值。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述和立论依据
• 1.1 海星酸性粘多糖的研究进展
• 1.1.1 酸性粘多糖的含义、分类与组成
• 1.1.2 酸性粘多糖的生物学活性
• 1.1.3 酸性粘多糖的制备原理概述
• 1.2 海星多不饱和脂肪酸的研究进展
• 1.2.1 多不饱和脂肪酸的命名和结构特点
• 1.2.2 多不饱和脂肪酸的生物功能
• 1.2.3 多不饱和脂肪酸的提取方法
• 1.3 海星纲动物皂苷的研究进展
• 1.3.1 海星皂苷化学结构的研究进展
• 1.3.2 海星皂苷的生物活性
• 1.3.3 海星皂苷的提取方法
• 1.4 选题的立论依据和研究意义
• 1.4.1 研究内容
• 1.4.2 主要创新点
• 1.4.3 主要经济与社会效益
• 2 酸性粘多糖的分离、纯化与鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 提取方法
• 2.1.3 蒽酮比色法测定糖含量
• 2.1.4 考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质含量
• 2.1.5 硫酸基鉴定
• 2.1.6 多糖的琼脂糖凝胶电泳
• 2.1.7 离子交换层析
• 2.1.8 分子筛层析
• 2.1.9 多糖分子量的测定
• 2.1.10 颜色反应
• 2.1.11 Sevag法脱蛋白
• 2.2 结果及讨论
• 2.2.1 砂海星酸性粘多糖组分表现性状
• 2.2.2 蒽酮比色法测定糖含量
• 2.2.3 考马斯亮蓝法测定蛋白含量
• 2.2.4 硫酸基的测定
• 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.6 离子交换层析
• 2.2.7 分子筛层析
• 2.2.8 利用分子筛层析法进行分子量的测定
• 2.2.9 颜色反应
• 2.2.10 Sevag法脱蛋白
• 2.3 结论
• 3 砂海星酸性粘多糖生物活性的实验研究
• 3.1 砂海星酸性粘多糖体外抗肿瘤活性实验
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.3 结果与讨论
• 3.1.4 结论
• 3.2 砂海星酸性粘多糖降血脂作用的活性实验
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 结果与分析
• 3.2.4 结论
• 4 砂海星多不饱和脂肪酸的提取与分析
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 仪器
• 4.1.3 药品
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 溶剂萃取
• 4.2.2 浓缩
• 4.2.3 硅胶柱层析
• 4.2.4 浓缩称重
• 4.2.5 气相色谱分析
• 4.3 结果
• 4.3.1 产率的计算
• 4.3.2 石油醚部分的脂肪酸组成分析结果
• 4.3.3 乙酸乙酯部分的脂肪酸组成分析结果
• 4.4 讨论
• 4.5 结论
• 5 砂海星皂苷的分离纯化和鉴定
• 5.1 研究的基础分析
• 5.1.1 海星皂苷的粗制
• 5.1.2 海星皂苷的精制
• 5.1.3 皂苷的鉴定
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 材料
• 5.2.3 仪器
• 5.2.4 方法
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 粗提结果
• 5.3.2 大孔吸附树脂精制结果
• 5.3.3 葡聚糖凝胶色谱纯化结果
• 5.3.4 高效液相检测结果
• 5.3.5 皂苷的鉴定结果
• 5.4 结论
• 6 总结与展望
• 6.1 活性物质的提取和纯化
• 6.2 酸性粘多糖的生物活性研究
• 6.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录