铁必复冲剂对肾虚耳聋大鼠耳蜗蛋白质表达的影响

论文摘要

[研究背景]研究表明,铁缺乏可使脑干诱发电位阈值提高,畸变产物耳声发射（distortion product otoacoustic emission,DPOAE）幅值下降,引出率降低。通过20余年的实验研究和临床应用的铁必复冲剂,对铁缺乏诱发的肾虚耳聋有显著的临床疗效,动物实验证明对听毛细胞的结构和功能有恢复作用。但其确切作用机理有待探索。蛋白质是生理功能的最终执行者,是生命现象的直接体现者,对蛋白质结构和功能的研究将直接阐明器官、组织在生理或病理条件下的变化机制。[目的]本实验将通过探讨铁必复冲剂对缺铁诱发肾虚耳聋大鼠耳蜗基底膜的蛋白质水平表达的影响,从对生物功能起决定作用的蛋白质水平深入地揭示补肾药剂治疗肾虚耳聋的分子生物学机制,探讨中医肾与耳联系的物质基础和生化机理。[方法]本实验应用蛋白质组学方法检测铁必复冲剂对耳蜗膜性结构和功能相关蛋白的表达,并对各组所检测到的蛋白质表达间的差异进行比较。实验选用体重25～35g的健康、无耳疾、ABR阈值正常的幼龄Wistar大鼠,模型制备阶段,随机分成正常对照大鼠组,喂以标准饲料16周;缺铁大鼠组,采用缺铁饲料喂养法建立缺铁动物模型,喂以缺铁饲料8周后,复制出至少有一耳ABR阈值改变≥15dB的大鼠共43只,再将该组大鼠随机分成肾虚耳聋组、铁必复治疗组,肾虚耳聋组继续喂以缺铁饲料8周,铁必复治疗组喂以铁必复饲料8周。分别取正常对照组、肾虚耳聋组和铁必复治疗组的大鼠耳蜗膜性组织进行样品处理、SDS—PAGE电泳分离、考马斯亮兰染色、胶内酶解抽提酶解肽段、液相色谱分离和电喷雾串联质谱（ESI-MS/MS）进行质谱鉴定,得到的质谱数据文件运用BIOWORKS软件搜索相应的蛋白库,最终获得相关蛋白质。[结果]正常对照、肾虚耳聋、铁必复冲剂治疗组分别检测出989、1019、873个（组）蛋白质,各组大鼠的耳蜗蛋白质组织分别检测出独有蛋白质523、762和896个,亦得出各不同蛋白质的名称、分子量、等电点、肽段序列、蛋白覆盖率及基峰峰值等相应信息,并按功能、组成等进行了多级分类。经铁必复冲剂治疗后,大鼠耳蜗膜性组织出现了Actin,aortic smooth muscle;Actin,cytoplasmic 1;Isoform 1of Titin等蛋白异构体,与正常组和肾虚耳聋组相比,Actin蛋白由3个增至5个,Titin蛋白由2个增至6个,并呈高表达。同时,铁必复治疗组中蛋白CochlinPrecursor出现表达,并呈高表达趋势,其肽段数为629条,覆盖率较高,为40.07%,可信度高,其他蛋白肽段数均在50条以下,蛋白覆盖率在30%以下。铁必复治疗组还出现了46 kDa protein、48 kDa protein等蛋白覆盖率较高（30～39%）的尚未命名而以分子量显示的蛋白,虽然功能及分子组成尚未明确,但蛋白覆盖率较高,提示其在耳蜗功能方面扮演着重要角色。[结论]1.大鼠耳蜗膜性组织中46 kDa protein、48 kDa protein等新蛋白质的出现可能与铁必复冲剂治疗作用有关。2.铁必复冲剂对肾虚耳聋的治疗作用可能与耳蜗Actin、Myosin、Titin、Cochlinprecursor等蛋白质的特异表达或高表达有关。3.铁必复冲剂可通过参与调控上述蛋白质表达而改善中医肾的功能。

论文目录

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• 缩略词表
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 附录
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