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人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆与初步鉴定

2020-11-22阅读(1042)

人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆与初步鉴定

论文摘要

肿瘤多药耐药性（multidrug resistance,MDR）是目前化疗在小细胞肺癌（SCLC）治疗中疗效不理想的主要因素。突破肿瘤的多药耐药障碍,提高化疗药物的治疗效果,是目前肿瘤基础和临床研究的重点和热点。目前比较公认的与肺癌多药耐药相关的机制主要有:1.细胞膜的药物转运蛋白将药物外排增加,如P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）、乳腺癌相关蛋白（BCRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）等;2.肿瘤细胞对抗肿瘤药物的解毒功能增强,如谷胱甘肽转移酶（GST）;3.药物靶酶改变对药物敏感性下降,如拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）;4.DNA修复功能增强;5.凋亡相关基因表达异常;6.信号转导中相关因子表达异常。但这些机制均不能完全解释小细胞肺癌MDR的形成,提示还有其它多药耐药机制存在。随着分子生物学技术的发展,基因克隆策略及技术得到了不断发展和成熟,这有助于利用有效的基因克隆技术发现新的小细胞肺癌多药耐药基因及耐药功能。目的:本研究试图利用前期工作中诱导建立的小细胞肺癌多药耐药细胞系构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库;了解部分差异片段在小细胞肺癌多药耐药细胞及多种肿瘤细胞中的表达情况,为进一步功能研究奠定基础。方法:（1）以小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP cDNA为实验方（Tester）,小细胞肺癌细胞H446 cDNA为对照方（Driver）,应用抑制消减杂交（SSH）技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库。（2）通过斑点杂交筛选、测序及同源性分析获取H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段。（3）利用半定量RT-PCR及Northernblot的方法检测差异表达片段中的PDE2A和I-2PP2A基因片段在人小细胞肺癌细胞H446、人小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP、人肺腺癌细胞A549、人肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP、人肝癌细胞SK-HEP-1、人B型淋巴瘤细胞Namalwa、人胃腺癌细胞SGC7901等7种肿瘤细胞中的表达情况。结果:成功构建了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达消减cDNA文库,获得21个H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段,经测序及同源性分析表明它们分别代表6个已知基因（同源性为96%-100%）。半定量RT-PCR及Northern blot结果表明:PDE2A仅在H446/CDDP细胞中有表达;I-2PP2A在H446细胞、H446/CDDP细胞及Namalwa细胞中均有表达,经进一步图像分析及统计学处理表明I-2PP2A在H446/CDDP细胞中的表达量明显高于在H446细胞中的表达量（P＜0.01）,H446/CDDP细胞与Namalwa细胞间的表达量无明显差异（P＞0.05）。结论:本研究表明SSH技术是筛选新的功能基因的有效方法,PDE2A及I-2PP2A基因在小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP中有差异高表达,它们可能参与了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP的耐药形成,进一步的功能研究,有利于了解这两个基因在小细胞肺癌多药耐药机制中所发挥的作用。

论文目录

  • 英文缩写索引
  • 英文摘要
  • 中文摘要
  • 论文正文 人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆与初步鉴定
  • 前言
  • 第一部分 人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二部分 人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的测序分析
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • PP2A在多种肿瘤细胞中表达的研究'>第三部分 PDE2A及 I-2PP2A在多种肿瘤细胞中表达的研究
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 全文小结
  • 致谢
  • 图片
  • 文献综述一 抑制消减杂交在肿瘤研究中的进展
  • 参考文献
  • 文献综述二 肿瘤多药耐药机制的研究进展
  • 参考文献
  • 在读期间发表的文章

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