人类白血病细胞中WT1及其下游基因的表达调控

论文题目: 人类白血病细胞中WT1及其下游基因的表达调控

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科学

作者: 胡绍燕

导师: 陈子兴

关键词: 启动子,增强子,绿色荧光蛋白,聚合酶链反应,实时定量,基因,基因,诱导分化,白血病,急性,白血病,慢性

文献来源: 苏州大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的1 探讨WT1 基因启动子和增强子调控基因表达的组织特异性;2 探讨RbAp46 基因在白血病发生、发展中的作用;3 探讨IGFBP-rP1 基因与白血病发生、发展的关系。方法1 利用DNA 重组技术分别构建含WT1 基因启动子和增强子的载体。2 转化大肠杆菌DH5α,碱裂解法抽提质粒进行酶切鉴定,利用QIAGEN 去内毒素大剂量质粒纯化试剂盒纯化质粒。3 优化电穿孔和脂质体转染条件,分别将含有WT1 基因启动子、WT1 基因启动子和增强子及空载体的质粒转染肿瘤细胞株中,包括WT1 基因高表达的造血细胞株K562、NB4、THP-1、SHI-1,WT1 基因低表达的造血细胞株U937、Jurkat;WT1基因高表达的非造血细胞株MCF-7、T47D、293,WT1 基因低表达的非造血细胞株ECV304、SMMC7721、HT-29、SHG44。4 合适剂量的G418 筛选2-4 周,用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白的平均荧光强度。5 优化SYBR Green I 实时定量PCR 条件,分别从DNA 和RNA 的水平检测质粒整合和表达的水平。6 优化SYBR Green I 实时定量PCR 检测RbAp46 基因的条件。7 建立实时定量PCR 筛选转基因细胞株的方法。8 实时定量RT-PCR 检测转WTA 的U937 和NB4 细胞株中WT1 及RbAp46 基因的表达水平。9 利用脂质体将全长RbAp46 基因的cDNA 转染人类白血病细胞株K562 细胞和人脑膜胶质瘤细胞株SHG44,利用有限性稀释方法和克隆柱挑选单克隆细胞,以RbAp46 基因过度表达的K562 单克隆细胞和SHG44 单克隆细胞为研究对象,进行生物学行为的观察,并进行相关基因的检测。10 收集临床病例标本,检测不同白血病类型和不同病程阶段的标本中RbAp46 基因的表达水平。11 优化SYBR Green I 实时定量PCR 检测IGFBP-rP1 基因的条件,检测不同白血病类型和不同病程阶段的标本中IGFBP-rP1 基因的表达水平。

论文目录:

研究背景

第一章 WT1基因的转录调控与组织特异性的研究

前言

第一节 WT1 调控元件载体构建

第二节 细胞转染

第三节 WT1 基因的转录调控作用:转基因细胞株的平均荧光强度测定

第四节 实时定量PCR 检测转基因细胞株中质粒整合和EGFP 的转录水平

第二章 WT1 基因的下游基因在白血病细胞的体内外研究

前言

第一节 WT1 基因与RbAp46 基因在白血病细胞株的相关性研究

第二节 过度表达RbAp46 基因对K562 及SHG44 细胞株生物学行为的影响

第三节 实时定量RT-PCR 检测白血病患者RbAp46 基因的表达

第四节 IGFBP-rP1 基因与RbAp46 及WT1 基因的相关性的体外研究

第五节 白血病患者中IGFBP-r P1 基因的表达及相关基因的分析

结论

综述

发表论文

致谢

发布时间: 2006-03-24

参考文献

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