论文摘要
目的:1.研究神经酰胺（C2-ceramide,Cer）作用下,Beclin1,LC3,Akt1,Foxo3a在卵巢癌细胞中的表达2.探讨Cer/Akt1/Foxo3a信号通路在卵巢癌发病机制中的作用。方法:1.应用MTT法检测在不同浓度C2-神经酰胺作用下,卵巢癌细胞的抑制率。2.应用FCM法检测不同浓度的C2-神经酰胺作用下,卵巢癌细胞的凋亡率。3.应用透射电镜观察在25μmol/L C2-神经酰胺作用下,卵巢癌细胞的自噬溶酶体。4.应用实时定量PCR法检测在25μmol/L C2-神经酰胺作用下Beclin1,LC3在卵巢癌细胞中的表达。5.应用Western blot法检测25μmol/L C2-神经酰胺作用下,Beclin1,LC3,Akt1,Foxo3a在卵巢癌细胞中的表达。结果:1.随着C2-神经酰胺浓度的增加,对卵巢癌细胞增殖的抑制越来越大,IC50为55.719μmol/L。2.卵巢癌细胞的凋亡对C2-神经酰胺具有浓度依赖,但小于25μmol/L C2-神经酰胺几乎不引起卵巢癌的凋亡。3.透射电镜观察25μmol/L C2-神经酰胺作用后卵巢癌细胞的自噬溶酶体数量显著增多。4. 25μmol/L C2-神经酰胺作用后Beclin1,LC3在卵巢癌细胞中mRNA和蛋白水平表达都是增加,LC3蛋白有两个亚基LC3Ⅰ和LC3Ⅱ, LC3Ⅰ,LC3Ⅱ表达都是增加,并且LC3Ⅱ高于LC3Ⅰ。5. 25μmol/L C2-神经酰胺作用下,p-Akt1（Ser473）蛋白表达减少;Foxo3a蛋白表达增加。结论:1. C2-神经酰胺可以通过Akt1/Foxo3a信号通路诱导卵巢癌细胞自噬性死亡。2. C2-神经酰胺可活化自噬相关基因Beclin1,LC3。